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斑點(diǎn)和狹線印跡是一種將混合的未經(jīng)分離的面定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上進(jìn)行雜交分析的簡單技術(shù),。用來檢測被印跡的1DNA制品中靶序列的相對豐度。
實(shí)驗(yàn)方法
- 多樣抽濾法
| 實(shí)驗(yàn)材料 | DNA |
|---|---|
| 試劑,、試劑盒 | SSC NaCl NaOH Tris·Cl |
| 儀器,、耗材 | 紫外透射儀 電泳儀 多樣抽濾加樣器 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. 裁一張與多樣過濾加樣器一樣大小的尼龍膜，將膜置于6×SSC的表面讓其自然浸沒,。放置10 min,。 2. 裁一張與多樣過濾加樣器一樣大小的Whatman 3 MM 濾紙,，用6×SSC浸濕。 3. 將Whatman 3 MM 濾紙置于多樣抽濾加樣器上,，將膜放置于其上,。將多樣抽濾加樣器按廠商說明書安裝好，確保裝置中不漏氣,。 4. 在DNA中加入20×SSC使其終濃度為6×SSC,，體積為200~400 μl，在100℃變性10 min,，然后置于冰中,。 5. 連接吸液裝置與多樣抽濾加樣器，每孔中加入500 μl 6×SSC,。 6. 將DNA樣品離心5 s,，將樣品加于各孔中，小心勿讓吸頭觸及膜,，讓樣品濾過,。 7. 拆開多樣過濾加樣器裝置，將膜置于一張浸過變性液的Whatman 3 MM 濾紙上,，放置10 min,。 8. 將膜轉(zhuǎn)至一張浸過中和液的的Whatman 3 MM 濾紙上。放置5 min,。 9. 將膜置于一張Whatman 3 MM 濾紙上,，晾干。 10. 將尼龍膜置于可透過紫外線的塑料夾層中,，將有DNA的一面朝下置于紫外透射儀上照射適當(dāng)?shù)臅r(shí)間以固定DNA,。 |
