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細(xì)胞凋亡檢測方法
細(xì)胞凋亡與壞死是兩種*不同的細(xì)胞凋亡形式，根據(jù)死亡細(xì)胞在形態(tài)學(xué),、生物化學(xué)和分子生物學(xué)上的差別，可以將二者區(qū)別開來,。細(xì)胞凋亡的檢測方法有很多,，下面介紹幾種常用的測定方法。
一,、細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測
根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征,，人們已經(jīng)設(shè)計了許多不同的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測方法。
1 光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡
（1） 未染色細(xì)胞：凋亡細(xì)胞的體積變小,、變形,，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體,。
貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮,、變圓、脫落,。
（2） 染色細(xì)胞：常用姬姆薩染色,、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮,、邊緣化,，核膜裂解、染色質(zhì)分割
成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài),。
2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況,。
常用的DNA特異性染料有：HO 33342 （Hoechst 33342），HO 33258 （Hoechst 33258）, DAPI,。三種染料與 DNA的結(jié)合是非嵌入式的,，主要結(jié)合在DNA的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光,。
Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料,，儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度，使用時用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml,。
DAPI為半通透性,，用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,，使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml,。
結(jié)果評判：細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased），部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài),；Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚,、邊緣化；Ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊,，產(chǎn)生凋亡小體（圖1）,。
1 光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡
（1） 未染色細(xì)胞：凋亡細(xì)胞的體積變小,、變形,，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體,。
貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮,、變圓、脫落,。
（2） 染色細(xì)胞：常用姬姆薩染色,、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮,、邊緣化,，核膜裂解、染色質(zhì)分割
成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài),。
2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況,。
常用的DNA特異性染料有：HO 33342 （Hoechst 33342），HO 33258 （Hoechst 33258）, DAPI,。三種染料與 DNA的結(jié)合是非嵌入式的,，主要結(jié)合在DNA的A-T堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光,。
Hoechst是與DNA特異結(jié)合的活性染料,，儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度，使用時用PBS稀釋成終濃度為2~5mg/ml,。
DAPI為半通透性,，用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1mg/ml的濃度,，使用終濃度一般為0.5 ~1mg/ml,。
結(jié)果評判：細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased），部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài),；Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚,、邊緣化；Ⅱb期的細(xì)胞核裂解為碎塊,，產(chǎn)生凋亡小體（圖1）,。
3 透射電子顯微鏡觀察
結(jié)果評判：凋亡細(xì)胞體積變小,，細(xì)胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象（cavitations）的空泡結(jié)構(gòu)（圖2）,；Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化,；細(xì)胞凋亡的晚期,，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體,。
結(jié)果評判：凋亡細(xì)胞體積變小,，細(xì)胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象（cavitations）的空泡結(jié)構(gòu)（圖2）,；Ⅱa期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化,；細(xì)胞凋亡的晚期,，細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體,。
