聯(lián)系電話
上海北諾生物科技有限公司
中級會員·14年
- 聯(lián)系人：
- 周經(jīng)理 劉經(jīng)理
- 電話：
- 021-57730393
- 手機：
- 15800960770
- 傳真：
- 86-021-61496710
- 地址：
- 上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
- 個性化：
- www.bnbiotech.com
- 網(wǎng)址：
- www.bnbiotech.com
掃一掃訪問手機商鋪
ELISA標準曲線的繪制要點
許多試劑檢測都涉及到標準曲線的問題,，標準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結果，甚至是關系到實驗的成敗，那么究竟如何繪制或制作標準曲線呢？
關于標準曲線的擬合方式,，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù),、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學反應中的曲線擬合,，但都只適用于曲線的一部分,，有的適用于前半段，有的適用于后半段,，有的適用于中間一段,，而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的適用性。當然,，如果用于定量,，還是在中間一段較好。這些方法雖然沒有一種方法可以通用,，但也都可以用,。關鍵在于你的標準曲線做到了S形的哪一部分,，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部分。在S曲線的低濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合,，中低濃度部分可以用直線方程,，中間部分可用對數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù),。
一,、做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意
1、樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的,，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,，否則后面的實驗結果無從談起。
2,、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內,，包括上限和下限,。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段,，即曲線幾乎成直線的范圍內,。
3、采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離,。
4、檢測標準樣品時,，應按濃度遞增順序進行,，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性,。
5,、標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點，但至少要保證有5個點,。
6,、做出的標準曲線相關系數(shù)因實驗要求不同而有所變動，但一般來說,，相關系數(shù)R至少要大于0.98,，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999.
二,、選擇什么方程去擬合
用于免疫檢測的所謂“標準曲線”其實稱為擬合曲線比較合適,。免疫檢測時標準點（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度如果和相應的吸光度（OD）值如果能夠呈現(xiàn)直線關系當然是的了，這時可以通過EXELL等方便的獲得擬合曲線,，進而推算出樣品的濃度值,。但我們做免疫檢測很少有時候能夠有這么理想的情況，標品濃度和相應OD值往往是"S"型的曲線關系,，這時就不能用直線擬合的方式了,，而對擬合方法進行選擇就是必要的了。
目前上zui流行的免疫檢測擬合方式是“四參數(shù)邏輯擬合”,，用這種擬合方式往往能夠比較的反映濃度和吸光度的曲線關系,，從而進一步比較正確的獲得樣品中待測物質的濃度值。
其實,，在一個長的區(qū)間內,，Logistic應該都能擬合得較為理想。但并不是說它就是的,。事實上不僅是ELISA,，其它很多生物學反應都是S形曲線，也都可以用Logistic曲線擬合,。但建模型是一回事,，而用它來定量是另一回事。如果用來定量,，S形曲線的中間段（較陡處）是比較好的,，而兩端的平坦部分計算誤差會大，有時甚至會很大,。
