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三,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
1.一只小鼠可獲得（1～2.5）×108個(gè)脾細(xì)胞。
2.細(xì)胞接種后一般幾小時(shí)內(nèi)就能貼壁,，并開(kāi)始生長(zhǎng),，如接種的細(xì)胞密度適宜，5天到一周即可形成單層,。
3.一般情況,，傳代后的細(xì)胞在2小時(shí)左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上，2～4天就可在瓶?jī)?nèi)形成單層,，需要再次進(jìn)行傳代,。
四、注意事項(xiàng)
1.取材要求新鮮,，無(wú)菌,，解剖小鼠時(shí)，注意不要損傷脾臟及其周?chē)呐K器,，尤其是腸道等,，防止污染脾臟,。
2.沖洗脾臟時(shí)要盡量洗凈血污，去除無(wú)用組織,，并要防止組織干燥,。
3.碾磨后及時(shí)用清水沖洗篩網(wǎng)，防止組織,、細(xì)胞阻塞網(wǎng)孔,。
4.計(jì)數(shù)前，注意吸盡平皿里的細(xì)胞,，充分混勻，使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞,。
5.實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在操作臺(tái)中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,，勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域操作。
6.金屬器械不能在火焰中燒的時(shí)間過(guò)長(zhǎng),，燒過(guò)的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織,，以免造成組織損傷。
7.另外膠塞過(guò)火焰時(shí)也不能時(shí)間長(zhǎng),，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,，危害培養(yǎng)細(xì)胞。
8.吸取過(guò)營(yíng)養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼,，因殘留在吸管頭中營(yíng)養(yǎng)液能燒焦形成炭膜,，再用時(shí)會(huì)把有害物帶入營(yíng)養(yǎng)液中。
9.不能用手觸及已消毒器皿瓶口,、瓶塞內(nèi)部,，吸管前部等所有可能與細(xì)胞接觸的部分，如已接觸,，要用火焰燒灼消毒或取備品更換,。
10.開(kāi)啟、關(guān)閉長(zhǎng)有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時(shí),，火焰滅菌時(shí)間要短,。防止因溫度過(guò)高燒死細(xì)胞。
11.換液時(shí)傾倒廢液,，瓶口不能接觸廢液缸,，速度不能過(guò)快，防止廢液四濺,。
12.吹打細(xì)胞時(shí),，要注意邊角的細(xì)胞是否吹打下來(lái)。
13.手或相對(duì)較臟的物品不能經(jīng)過(guò)開(kāi)放的瓶口上,，即不可以在開(kāi)放容器上方操作,。
14.每次操作只處理一株細(xì)胞，以免造成細(xì)胞交叉污染,。
15.注意自身的安全，對(duì)于來(lái)自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心,。操作過(guò)程中,，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心有毒性試劑例如DMSO,，并避免尖銳物品傷人等,。
16.從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存，但為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液,。
17.將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí)，要做好防護(hù)工作,，以免凍傷,。
18.凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。
