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三、實(shí)驗結(jié)果計算
1.一只小鼠可獲得（1～2.5）×108個脾細(xì)胞,。
2.細(xì)胞接種后一般幾小時內(nèi)就能貼壁,，并開始生長，如接種的細(xì)胞密度適宜,，5天到一周即可形成單層。
3.一般情況,，傳代后的細(xì)胞在2小時左右就能附著在培養(yǎng)瓶壁上,，2～4天就可在瓶內(nèi)形成單層，需要再次進(jìn)行傳代,。
四,、注意事項
1.取材要求新鮮，無菌,，解剖小鼠時,，注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器，尤其是腸道等,，防止污染脾臟,。
2.沖洗脾臟時要盡量洗凈血污，去除無用組織,，并要防止組織干燥,。
3.碾磨后及時用清水沖洗篩網(wǎng)，防止組織,、細(xì)胞阻塞網(wǎng)孔,。
4.計數(shù)前，注意吸盡平皿里的細(xì)胞,，充分混勻,，使細(xì)胞分散成單個細(xì)胞。
5.實(shí)驗操作應(yīng)在操作臺中央無菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,，勿在邊緣非無菌區(qū)域操作,。
6.金屬器械不能在火焰中燒的時間過長，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織,，以免造成組織損傷,。
7.另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,，危害培養(yǎng)細(xì)胞,。
8.吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營養(yǎng)液能燒焦形成炭膜,，再用時會把有害物帶入營養(yǎng)液中,。
9.不能用手觸及已消毒器皿瓶口,、瓶塞內(nèi)部，吸管前部等所有可能與細(xì)胞接觸的部分,，如已接觸,，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。
10.開啟,、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時,，火焰滅菌時間要短。防止因溫度過高燒死細(xì)胞,。
11.換液時傾倒廢液,，瓶口不能接觸廢液缸，速度不能過快,，防止廢液四濺,。
12.吹打細(xì)胞時，要注意邊角的細(xì)胞是否吹打下來,。
13.手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上,，即不可以在開放容器上方操作。
14.每次操作只處理一株細(xì)胞,，以免造成細(xì)胞交叉污染,。
15.注意自身的安全，對于來自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心,。操作過程中,，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心有毒性試劑例如DMSO,，并避免尖銳物品傷人等,。
16.從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存，但為對數(shù)生長期細(xì)胞,。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液,。
17.將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做好防護(hù)工作,，以免凍傷,。
18.凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。
