提取動物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA

實驗?zāi)康?/span>

       研磨破碎軟骨組織（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨）,，提取其總RNA,。

實驗原理

       充分磨碎軟骨樣品（大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨）,，再用相關(guān)試劑提取其總RNA。

實驗材料和器具

樣品：大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨

儀器：多樣品組織研磨儀（上海凈信,，Tissuelyser-24）

耗材：研磨罐（上海凈信,，***ml），研磨珠（上海凈信,，***mm,，***顆）

試劑：液氮若干

實驗步驟

1.研磨軟骨組織

1.1 取適量大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨組織，剪切成約***立方厘米小塊,；

1.2 將小塊軟骨組織置于液氮中***分鐘或放入***度冰箱冷凍30分鐘,；

1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐中，蓋好蓋子,；

1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管,，放入已經(jīng)在***度冰箱預(yù)冷好的適配器中，加入變性液,，β-巰基乙醇,；

1.5 將適配器放入凈信研磨儀中，在***hz條件下,，研磨***min,，可得到勻漿狀的軟骨組織；

2.總RNA提取

2.1 冰水浴下,，加酸性水飽和酚,，搖勻，加醋酸鈉,，異戊醇混合液,，冰水浴上***min；

2.2 ***℃下,，離心,，取上清液，加異戊醇混合液,，離心取上清,，加異丙醇,，***℃下沉淀，離心,，得到凝膠狀RNA和蛋白多糖混合沉淀,，加無RNA酶水，溶解得膠狀溶液,；

2.3 取膠狀溶液用plant RNAout試劑盒的RNA提取步驟得到總RNA沉淀,，取沉淀，乙醇洗滌后用無RNA酶水溶解沉淀,，即得關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA溶液,。

實驗結(jié)果

       采用本實驗方法提取的動物關(guān)節(jié)軟骨組織總RNA的收率高，并且純度高,、質(zhì)量,、完整性好，可以滿足分子生物學(xué)研究應(yīng)用,。

                     總RNA甲醛變性膠電泳結(jié)果

          Ⅱ型膠原PCR擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果