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實驗步驟
每50~100mg 組織加入0.2體積 TRIzol
1.加鋼珠1顆,設(shè)置研磨儀參數(shù):12單位振頻,1min,每種樣品基本充分勻漿
2. 將上述勻漿液每0.2體積 TRIzol 試劑用量的勻漿液中加入0.04體積,,蓋緊管蓋,,手動劇烈震搖15 秒鐘,,然后室溫靜置2~3 分鐘,。
3. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。
4. 小心吸取上層水相(無色)加入到新試管中,,同時計算所吸取的水相體積,。不用過多吸取,防止吸入DNA和蛋白雜質(zhì)(中間層,,白色),。
5. 加入所吸取水相等體積預(yù)冷的異丙醇,蓋緊管蓋,,輕輕搖勻,。
6. 室溫靜置10 分鐘,,待RNA 充分沉淀(為減少RNA 降解,此步驟可省略),。
7. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘,。
8. 將上清棄除(注意別丟棄沉淀),每管加入0.2體積75%乙醇潤洗,,蓋緊管蓋,,輕輕晃動試管,以去除殘留的異丙醇和鹽份,。4℃ 7,500g 離心5 分鐘,。
9. 將上清棄除(注意別丟棄沉淀),打開管蓋,,將RNA 沉淀干燥(室溫?fù)]發(fā)或真空干燥),。注意RNA 沉淀不可干燥,否則難以溶解,。
10. 將RNA 沉淀溶解于適量的無RNase 水中,。如果RNA 沉淀溶解不,將使OD260/OD280≤1.6,。此RNA 溶液可用于進一步實驗,或者-70℃保存,。
實驗結(jié)果
1肝2腦3植物4心臟5肌肉6肝7肝. 1肝2腦3植物4心臟
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