2× LongHiFi PCR Mix為多種采用zui xian進(jìn)基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成，極大的提高了擴(kuò)增長度,、擴(kuò)增速度,、保真性和產(chǎn)量,。2× LongHiFi PCR Mix是長片段,、超保真,、快速擴(kuò)增的shou選產(chǎn)品,。
2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)

2× LongHiFi PCR Master Mix (含染料)

 

2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)

目錄號:71814

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存,，有效期 2 年,。

經(jīng)常使用，可置于 4 °C 保存,，有效期 3 個月,。

產(chǎn)品簡介

2× LongHiFi PCR Mix為多種采用zui xian進(jìn)基因工程改造而來的超保真酶添加延伸因子混合而成，極大的提高了擴(kuò)增長度,、擴(kuò)增速度,、保真性和產(chǎn)量。2× LongHiFi PCR Mix是長片段,、超保真,、快速擴(kuò)增的shou選產(chǎn)品。

PCR產(chǎn)物為平末端,，不需要加A頭,，可直接用Blunt平末端系列載體克隆。

本產(chǎn)品包含LongHiFi DNA Polymerase,、dNTPs和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,，濃度為2×。使用時,，只需加入模板,、引物，并補(bǔ)足水至Mix終濃度為1×即可,。

本制品含紅色示蹤染料,，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進(jìn)行電泳；也可經(jīng)過純化處理,，以用于酶切、連接,、熒光測序等后續(xù)操作,。

產(chǎn)品特點

1. 高產(chǎn)：一般 PCR 產(chǎn)物量比傳統(tǒng)產(chǎn)量高 50%-100%！

2. 高效：延伸速度可以達(dá)到 3-4kb/min,，是 pfu 的 6-8 倍,！

3. 高成功率：對于高 GC 模板和特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板有良好效果,！

4. 超高保真：保真度是 taq 的 81 倍以上。

5. 擴(kuò)增長度長：以復(fù)雜基因組 DNA 為模板擴(kuò)增可達(dá) 10kb,，以簡單基因組,、質(zhì)粒和噬菌體 DNA 為模板擴(kuò)增可達(dá) 15kb。

2 × LongHiFi PCR Master Mix 使用說明：

一,、配制 PCR 反應(yīng)體系：(于冰上配制)

參考模板用量：（以 50 μl 反應(yīng)體系為例）

質(zhì)粒：0.1-10 ng,；

細(xì)菌基因組：10-100 ng；

人類基因組：50-150 ng,；

cDNA：1-5 μl from RT,。

注意：實際操作中，首先要計算好需要補(bǔ)加 ddH2O 的量以后,，建議先加水,，然后按上述順序添加其它成分，最后加 LongHiFi PCR Mix,，瞬離,，上機(jī)。

二,、設(shè)置 PCR 循環(huán)條件：（請根據(jù)實際情況適當(dāng)調(diào)整）

注意：一般情況下,，Annealing Temperature = Tm - 5°C

1. 質(zhì)粒和簡單基因組等簡單模板，可以采用 10-15 sec/kb,；復(fù)雜模板 ( 如人類基因組 DNA ),，可以采用 20-25 sec/kb。

2. 對于高 GC 含量的模板,，預(yù)變性和變性溫度可以提高到 98℃,。

3. 如果電泳發(fā)現(xiàn)主帶上下拖尾模糊現(xiàn)象，或者泳道出現(xiàn)從上樣孔拖下來的涂抹帶現(xiàn)象,，一般提示延伸時間過長,，梯度縮短延伸時間（建議 10-15sec/kb 為梯度減少延伸時間）直到獲得滿意結(jié)果。

三,、結(jié)果檢測：反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物,，瓊脂糖凝膠電泳檢測。

2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相關(guān)