KOD DNA Polymerase 是從克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的質粒在大腸桿菌中經(jīng)誘導表達分離純化而來,。該酶所具有的chao強3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高
KOD DNA Polymerase(含超純dNTP) PCR相關

KOD DNA Polymerase (含超純 dNTP)

 

KOD DNA Polymerase(含超純dNTP) PCR相關

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產(chǎn)品內容

保存條件

-20℃保存，有效期 2 年。

產(chǎn)品簡介

KOD DNA Polymerase 是從克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的質粒在大腸桿菌中經(jīng)誘導表達分離純化而來,。該酶所具有的chao強3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高,，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍,，同時具有合成速度快的特點,，聚合速度約為普通Pfu DNA Polymerase的5倍,，Taq DNA Polymerase的2倍,，達到100-138bp/秒,，可以在短時間內獲得高產(chǎn)量的擴增產(chǎn)物，特別適合于高保真地擴增6kb以內的PCR 產(chǎn)物,，擴增所得的DNA為平末端,，可直接用于Blunt (平末端)載體克隆（Cat#V116,、V117）,，也可用于基因克隆、表達及突變分析等分子生物學實驗,。

活性單位:

KOD DNA Polymerase 活性定義為在 75°C 活性測定條件下,，在 30 min內攝入 10nmoles 的 dNTPs 使成為酸性不溶物時所需要酶的活性定義為1U。

質量控制:

SDS-PAGE 檢測純度大于 99%,，經(jīng)檢測無外源核酸酶活性,；PCR 方法檢測無宿主殘余 DNA，能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因,；室溫存放一周,，無明顯活性改變。

適用范圍：

用于DNA的高保真擴增,，如基因表達克隆,、基因定點突變、細胞內基因點突變分析（SNP）和平末端補平等,。

注意事項：

高保真KOD對于dNTP純度要求很高,，因此建議用本酶配套的超純dNTP mix。

KOD DNA Polymerase的使用說明：

一,、配制 PCR 反應體系：(于冰上配制)

參考模板用量（50 μl 反應體系）：

質粒：5-20 ng,；細菌基因組：10-100 ng；人類基因組：50-100 ng,；cDNA：1-2 μl ,。

注意：用 ddH2O 補足反應體系（體積）至 50 μl。實際操作中，首先要計算好需要補加ddH2O 的量以后,，建議先加水,，然后按上述順序添加其它成分，最后添加 KOD DNA Polymerase,。充分混勻后,，離心數(shù)秒使反應混合物沉到管底，然后將反應管置于 PCR 儀中進行擴增,。

二,、設置 PCR 循環(huán)條件：（請根據(jù)實際情況適當調整）

注意：一般情況下，Annealing Temperature = Tm - 5°C

如果擴增片段小于 4 kb,，建議 KOD 酶的延伸速度為 1kb / 15 sec,；

如果擴增片段大于 4 kb，建議延伸速度為 1kb / 20-30 sec,。

三,、結果檢測：反應結束后取 5 µl 反應產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測,。

KOD DNA Polymerase(含超純dNTP) PCR相關