ELISA實(shí)驗(yàn)報(bào)告

凡購(gòu)買(mǎi)慧穎生物ELISA試劑盒提供免費(fèi)代測(cè)，如下為實(shí)驗(yàn)原理及操作方法

客戶(hù)及指標(biāo)信息

檢測(cè)指標(biāo)*：                                              

試劑盒來(lái)源*：                                                 

前言

酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay,，ELISA）的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后,，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析,。

ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體,。該法適于測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清,、血清、血漿及組織液中的樣本,，干擾小可以測(cè)到每毫升納克水平的細(xì)胞因子（或受體）的水平,。

材料與方法

1 材料

1.1 主要試劑

ELISA檢測(cè)試劑盒

1.2 主要儀器及耗材

酶標(biāo)儀：芬蘭（Labsystems Multiskan MS）公司產(chǎn)品

洗板機(jī)：芬蘭（Thermo Labsystems）公司產(chǎn)品

離心機(jī)：微量高速離心機(jī)（國(guó)產(chǎn)）

移液器：吉爾森P型移液器(Pipetman)產(chǎn)品

培養(yǎng)箱：隔水式恒溫培養(yǎng)箱（國(guó)產(chǎn)）產(chǎn)品

其他所需耗材均為國(guó)產(chǎn)。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

（1）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：標(biāo)準(zhǔn)品按照說(shuō)明書(shū)稀釋好五個(gè)梯度,，各個(gè)梯度每孔加樣量都為50Μl,；

（2）加樣：分別設(shè)空白孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μL,，然后再加待測(cè)樣品10μL,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,；

（3）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30min；

（4）配液洗滌：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,；小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，靜置30sec后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,；

（5）加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μL，空白孔除外,；

（6）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30min,；

（7）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30sec后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干；

（8）顯色：每孔先加入顯色劑A50μL,，再加入顯色劑B50μL,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15min,；

（9）終止：每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)；

（10）測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15min以?xún)?nèi)進(jìn)行。

2.2  計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為綜坐標(biāo),，OD值為橫坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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