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Elisa試劑盒的試劑,,良好的儀器和正確的操作是保證Elisa檢測結果準確可靠的必要條件。Elisa試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異,,國內醫(yī)學檢驗一般均用板式點,。本文將敘述板式Elisa各個操作步驟的注意要點,珠式,、管式及磁性球Elisa,,國外試劑均與特殊儀器配合應用,兩者均有詳細的使用說明,,嚴格遵照規(guī)定操作,,必能得出準確的結果。
Elisa試劑盒標本的采取和保存
可用作Elisa測定的標本十分廣泛,體液(如血清),、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液,、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清,、尿液),,有些則需經(jīng)預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分Elisa檢測均以血清為標本,。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,,其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑,,而血清標本只要待血清自然凝固,、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外,,在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本,。在Elisa中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規(guī)方法采集,,應注意避免溶血,,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的Elisa測定中,,溶血標本可能會增加非特異性顯色,。
血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,,菌體中可能含有內源性HRP,,也會產(chǎn)生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,,其中的可發(fā)生聚合,,在間接法Elisa中可使本底加深。一般說來,,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,,超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后,,蛋白質局部濃縮,,分布不均,應充分混勻宜輕緩,,避免氣泡,,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩,?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,,也可加入適當防腐劑,。
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