人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）ELISA Kit說(shuō)明書

中文別名：人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）ELISA Kit,；人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）ELISA檢測(cè)試劑盒；人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）ELISA酶免試劑盒

英文名稱：Human 6-keto-prostaglandin F1a,6-K-PGF1a ELISA Kit

產(chǎn)品類型：酶免,、ELISA Kit

價(jià)格：1500元

種屬：Human

待測(cè)物名稱：6-keto-prostaglandin F1a,6-K-PGF1a

縮寫：6ketoPGF1a

樣本類型：serum, plasma and tissue homogenates

檢測(cè)范圍：3ng/mL -100 ng/mL

試劑盒性能：1）樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上,。

            2）批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%

保存溫度：4°C（三個(gè)月內(nèi)使用）；-20°C（三個(gè)月后使用）

有效期：4°C（保存6個(gè)月）,；-20°C（保存一年）

注意：本試劑盒僅供科研使用

目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清,，血漿及相關(guān)液體樣本中6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理：

  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）水平,。用純化的人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）,，再與HRP標(biāo)記的6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人6酮前列腺素F1a（6-keto-PGF1a）濃度。

試劑盒組成：

操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,，在*,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻；然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為90 ng/mL,，60 ng/mL ,，30 ng/mL，15 ng/mL,，7.5 ng/mL）,。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

7.溫育：操作同3,。

8.洗滌：操作同5,。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)     

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋      倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度,。