詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原,;小分子蛋白或化合物等分子量小,,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA,、OVA,、HAS等,。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔,、雞,、大小鼠等,大量時需要用到狗,、綿羊,、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔,、綿羊,、山羊可采用靜動脈采血,家兔,、豚鼠,、大鼠、雞可采用心臟采血,,家兔,、山羊、綿羊可采用靜脈采血,。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,,特異性強,,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量,、相對分子的質(zhì)量,、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑,。
產(chǎn)品名稱 | 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體 |
英文名稱 | phospho-APG4B(Ser309) |
規(guī)格 | 0.1ml |
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公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,,抗體是用于化學反應(yīng)、分析化驗,、研究實驗,、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,,產(chǎn)品品質(zhì),,價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善,??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,,純化鑒定后可直接作為免疫原,。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見偶聯(lián)載體如BSA,、OVA、HAS等,。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔,、雞,、大小鼠等,大量時需要用到狗,、綿羊,、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔,、綿羊,、山羊可采用靜動脈采血,家兔,、豚鼠,、大鼠、雞可采用心臟采血,,家兔,、山羊、綿羊可采用靜脈采血,。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,,特異性強,,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量,、相對分子的質(zhì)量,、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存,??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久,。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑,。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應(yīng)用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化,。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中,。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體,;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5,;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸,;70%乙醇,;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液,;
2.儀器
凝膠過濾柱,;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾,。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行,;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml,;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天),;
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低,;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2,、選擇實驗活體,。
3、進行動物免疫實驗,。
4,、試取血樣進行測試,查看免疫效果,。
5,、如果免疫成功,殺死實驗活體,,采集全部血清,。
6、純化出抗體,。
7,、鑒定抗體,。胎牛血清(無菌采制)
雪白曲霉現(xiàn)貨,ATCC菌株
彎孢霉屬菌種培養(yǎng),,ATCC菌株
田無鏈霉菌保存,,ATCC菌株
天青鏈霉菌售價,ATCC菌株
同絲毛殼現(xiàn)貨,,ATCC菌株
天藍微紅鏈霉菌變種培養(yǎng),,ATCC菌株
炭角菌屬保存,ATCC菌株
貪噬菌屬菌種售價,,ATCC菌株
RAB11家族相互作用蛋白3(RAB11FIP3)ELISA Kit for RAB11 Family Interacting Protein 3 (RAB11FIP3)規(guī)格:48T/96T
肌球蛋白ⅤC(MYO5C)ELISA Kit for Myosin VC (MYO5C)規(guī)格:48T/96T
磷酶D5(PLD5)ELISA Kit for Phospholipase D5 (PLD5)規(guī)格:48T/96T
Paralemmin 3蛋白(PALM3)ELISA Kit for Paralemmin 3 (PALM3)規(guī)格:48T/96T
皮層肌動蛋白(CTTN)ELISA Kit for Cortactin (CTTN)規(guī)格:48T/96T
外異蛋白A(EDA)ELISA Kit for Ectodysplasin A (EDA)規(guī)格:48T/96T
鈣黏蛋白24(CDH24)ELISA Kit for Cadherin 24 (CDH24)規(guī)格:48T/96T
核糖核酶A9(RNASE9)ELISA Kit for Ribonuclease A9 (RNASE9)規(guī)格:48T/96T
半乳糖凝集素9B(GAL9B)ELISA Kit for Galectin 9B (GAL9B)規(guī)格:48T/96T
酰膽堿酯酶(AchE)ELISA Kit for Acetylcholinesterase (AchE)規(guī)格:48T/96T
神經(jīng)絲束蛋白(NPTN)ELISA Kit for Neuroplastin (NPTN)規(guī)格:48T/96T
嘌呤基轉(zhuǎn)移酶(TPMT)ELISA Kit for Thiopurine Methyltransferase (TPMT)規(guī)格:48T/96T
磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體Human thrombomodulin,TM 檢測試劑盒 血栓調(diào)節(jié)蛋白* 規(guī)格: 48T/96T
Human thrombin-antithrombin complex,TAT 檢測試劑盒 凝血酶抗凝血酶復(fù)合物* 規(guī)格: 48T/96T
Human thrombin receptor,TR 檢測試劑盒 凝血酶受體* 規(guī)格: 48T/96T
Human Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI 檢測試劑盒 纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物* 規(guī)格: 48T/96T
Human Tetanus Antibody 檢測試劑盒 破傷風抗體* 規(guī)格: 48T/96T
Human terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 檢測試劑盒 末端補體復(fù)合物C5b-9* 規(guī)格: 48T/96T
Human tenascin-R,TN-R 檢測試劑盒 肌腱蛋白R* 規(guī)格: 48T/96T