詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體,。
3,、進行動物免疫實驗。
4,、試取血樣進行測試,,查看免疫效果。
5,、如果免疫成功,,殺死實驗活體,采集全部血清,。
6,、純化出抗體。
7,、鑒定抗體,。胎牛血清(無菌采制)
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學反應(yīng),、分析化驗,、研究實驗、教學實驗,、化學配方使用的純凈化學品,,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,,多種規(guī)格供應(yīng),,售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 原始廣泛存在蛋白1抗體 |
英文名稱 | AUP1 |
規(guī)格 | 0.2ml |
?
抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,,純化鑒定后可直接作為免疫原,。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見偶聯(lián)載體如BSA,、OVA、HAS等,。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠,、家兔、雞,、大小鼠等,,大量時需要用到狗、綿羊,、山羊等,。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊,、山羊可采用靜動脈采血,,家兔、豚鼠,、大鼠,、雞可采用心臟采血,家兔,、山羊,、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,,具有高效,特異性強,,純度高的特定,。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量,、純度以及特異性,。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久,。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑,。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原,;小分子蛋白或化合物等分子量小,,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA,、OVA、HAS等,。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠,、家兔、雞,、大小鼠等,,大量時需要用到狗、綿羊,、山羊等,。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊,、山羊可采用靜動脈采血,,家兔、豚鼠,、大鼠,、雞可采用心臟采血,家兔,、山羊,、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,,具有高效,特異性強,,純度高的特定,。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量,、純度以及特異性,。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,,而真空干燥保存時間可以更久,。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應(yīng)用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng),。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化,。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體,;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5,;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸,;70%乙醇,;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液,;
2.儀器
凝膠過濾柱,;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾,。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行,;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml,;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天),;
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低,;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
妊娠皰疹抗體HG英文名稱:Human Herpes Gestation, HG
胎盤生長因子PLGF英文名稱:Human placenta growth factor, PLGF
FMS樣酪氨酸激酶3配體Flt3L英文名稱:Mouse FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt-3L
糖蛋白130gp130英文名稱:Mouse glucoprotein 130, gp130
γ干擾素IFN-γ英文名稱:Mouse Interferon γ , IFN-γ Kit
胰島素樣生長因子2IGF-2英文名稱:Mouse Insulin-like growth factor 2, IGF-2
白介素13IL-13英文名稱:Mouse Interleukin 13, IL-13
白介素18IL-18英文名稱:Mouse Interleukin 18, IL-18
凝血酶TM英文名稱:Human Thrombin, TM
凝血因子ⅦFⅦ英文名稱:Human coagulation factor Ⅶ, FⅦ
可溶性白細胞抗原GsHLA-G英文名稱:Human soluble human leucocyte antigen G1, sHLA-G
凝血酶原PT英文名稱:Human Prothrombin, PT
補體因子DCFD英文名稱:Human complement factor D, CFD
血漿纖維連接蛋白pFN英文名稱:Human Plasma fibronectin, pFN
細胞纖維連接蛋白cFn英文名稱:Human cellular fibronectin, cFn
原始廣泛存在蛋白1抗體丁香假單胞菌種屬: Pseudomonas syringae分離基物: 天牛腸道提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 飼料用纖維素酶,、植酸酶,、木聚糖酶等的篩選培養(yǎng)基: 0002生長條件: 26℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法,;礦物油法
Rhodococcus fascians分離基物: 水樣/下層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 1.海洋石油污染生物修復; 58.生物活性物質(zhì)篩選培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法,;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Enterobacter cloacae分離基物: 土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
Aspergillus niger分離基物: 酶曲提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 糖化酶菌,。培養(yǎng)基: CM0015生長條件: 28-30℃存儲條件: 定期移植法,;其他
Micromonospora sp.分離基物: 海灘土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 抗細菌;抗金黃色葡萄球菌,;抗枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C存儲條件: 真空冷凍干燥
Micromonospora sp.分離基物: 山林土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 活性物質(zhì),;抑制凝血酶的活性培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C存儲條件: 真空冷凍干燥
Saccharomyces cerevisiae提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 釀造醬油。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法,;定期移植法
Staphylococcus aureus分離基物: 奶牛乳房炎乳樣提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究培養(yǎng)基: 335生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法;
Saccharomyces cerevisiae提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 面包,、各類發(fā)酵面制品。培養(yǎng)基: CM0013生長條件: 26~28℃存儲條件: 礦物油法