詳細(xì)介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA,、HAS等,。
2. 免疫動(dòng)物:常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔,、雞,、大小鼠等,大量時(shí)需要用到狗,、綿羊,、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔,、綿羊,、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,家兔,、豚鼠,、大鼠、雞可采用心臟采血,,家兔,、山羊、綿羊可采用靜脈采血,。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,,特異性強(qiáng),,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量,、相對分子的質(zhì)量,、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),,而真空干燥保存時(shí)間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑,。
產(chǎn)品名稱 | ?;o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體 |
英文名稱 | ACBD4 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng),、分析化驗(yàn),、研究實(shí)驗(yàn),、教學(xué)實(shí)驗(yàn)、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,,產(chǎn)品品質(zhì),,價(jià)格實(shí)惠,多種規(guī)格供應(yīng),,售后完善,。抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA,、HAS等,。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔,、雞,、大小鼠等,大量時(shí)需要用到狗,、綿羊,、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔,、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血,,家兔,、豚鼠、大鼠,、雞可采用心臟采血,,家兔、山羊,、綿羊可采用靜脈采血,。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,,具有高效,,特異性強(qiáng),純度高的特定,。接著要鑒定純化蛋白的含量,、相對分子的質(zhì)量,、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存,??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià),,而真空干燥保存時(shí)間可以更久,。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(shí)(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng),。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化,。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng),。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體,;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液,;100g/L三醋酸,;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5),;胺T反應(yīng)終止緩沖液,;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器,;玻璃纖維濾,。
(三)操作要點(diǎn)
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年,;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天),;
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會(huì)對抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見,。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動(dòng)物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
e.其它材料及試劑
2,、選擇實(shí)驗(yàn)活體。
3,、進(jìn)行動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn),。
4、試取血樣進(jìn)行測試,,查看免疫效果,。
5、如果免疫成功,,殺死實(shí)驗(yàn)活體,,采集全部血清,。
6、純化出抗體,。
7,、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
αL艾杜糖苷酸酶IDUA英文名稱:Human α-L-iduronidase, IDUA
α2抗纖溶酶α2-AP英文名稱:Human α2-Antiplasmin, α2-AP
L苯丙氨酸解氨酶PAL英文名稱:Human L-Phenylalanine ammonla-lyase, PAL
5核苷酸酶5-NT英文名稱:Human 5-Nucleotidase, 5-NT
肌酸激酶CK英文名稱:Human Creatine Kinase, CK
靶向核糖核酸酶TR英文名稱:Human targeted ribonuclease, TR
蛋白激酶CPKC英文名稱:Human protein kinase C, PKC
醛縮酶ALD英文名稱:Human Aldolase, ALD
L-乳酸脫氫酶L-LDH英文名稱:Human L-Lactate Dehydrogenase, L-LDH
酸性神經(jīng)鞘磷脂酶ASM英文名稱:Human acid sphingomyelinase, ASM
花生四烯酸5脂加氧酶ALOX-5英文名稱:Human arachidonate 5-lipoxygenase, ALOX-5
5脂加氧酶5-LO/LOX英文名稱:Human 5-lipoxygenase, 5-LO/LOX
腺苷酸環(huán)化酶1AC-1英文名稱:Human adenylyl cyclase 1, AC-1
可溶性腺苷酸環(huán)化酶sAC英文名稱:Human Soluble Adenylate Cyclase, sAC
鳥氨酸脫羧酶ODC英文名稱:Human Ornithine decarboxylase, ODC
?;o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體Saccharomyces cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 深層發(fā)酵啤酒酵母,。培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25-28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
灰平鏈霉菌種屬: Streptomyces griseoplanus分離基物: 草地土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株;產(chǎn)生alazopeptin培養(yǎng)基: 0038生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
普羅菲登斯菌種屬: Providencia sp.提供形式: 其他安全等級(jí): 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 41 18培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
魯氏接合酵母種屬: Zygosaccharomyces rouxii提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 釀造醬油,甜醬,。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法,;真空冷凍干燥法
Streptococcus plurextorum模式菌株: 未知
Corynebacterium glutamicum提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)谷氨酸。培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法,;定期移植法
山夫登堡沙門氏菌種屬: Salmonla senftenberg提供形式: 凍結(jié)物安全等級(jí): 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 1,3,19 g,s,t -培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲(chǔ)條件: 定期移植法
Streptomyces glaucoviolaceus var. pallens提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
野油菜黃單孢菌種屬: Xanthomonas campestris提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法