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產(chǎn)品分類：免疫組化

儲(chǔ)存條件：4℃,12個(gè)月

用途：組織化學(xué)常用緩沖液

注意事項(xiàng)：主要由磷酸二氫鹽(鈉/鉀)和磷酸氫二鹽(鈉/鉀)溶液組成,按不同比例混合后獲得對(duì)用PH值,。pH值可選5.3,5.6,5.91,6.24,6.47,6.64,6.81,6.98,7.17,7.73,8.04,。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因,；

EDTA是四元酸,，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示,，溶解度很小,，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2,、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈,，烘干,。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min,，再用自來(lái)水、純水洗凈,，烘干,、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn,，蓋好小表面皿,。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,，待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,，用純水稀釋至標(biāo)線,，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量,，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱,；柱溫120℃,；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃,；分流進(jìn)樣,，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000,。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液,，一份置冷處保存，一份置室溫中保存,，在第1,、3、7,、10,、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液,。照氣相色譜法,，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái),，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

腐皮鐮孢菌二單加氧5抗體Human AMHR2 (Anti-Muellerian hormone type-2 receptor) ELISA KIT綿羊甲狀腺(T4)免疫試劑盒

球孢白僵菌磷化脆性X綜合征相關(guān)蛋白AFF1抗體Human EHMT2 (Histone-lysine N-methyltransferase EHMT2) ELISA KIT綿羊基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP9/Gelatinase B)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌果糖-3激抗體Human DIO1(Type I iodothyronine deiodinase) ELISA Kit綿羊基質(zhì)金屬蛋白3(MMP3)免疫試劑盒

糞產(chǎn)堿桿菌甲精結(jié)合蛋白3抗體Human ADORA1(Adenosine receptor A1) ELISA Kit綿羊基質(zhì)金屬蛋白1(MMP1)免疫試劑盒

MarisediminicolaⅢ型纖維連接蛋白域蛋白3A抗體Human AMMECR1L (AMMECR1-like protein) ELISA KIT綿羊饑餓激(GHRL)免疫試劑盒

毛栓孔菌Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白4抗體Human AEN (Apoptosis-enhancing nuclease) ELISA KIT綿羊黃體生成(LH)免疫試劑盒

日本曲霉卵泡激結(jié)合蛋白2抗體Human AMN (Protein amnionless) ELISA KIT綿羊(cAMP)免疫試劑盒

北里胞菌葉鹽多谷合成抗體Human AATK (Serine/threonine-protein kinase LMTK1) ELISA KIT綿羊環(huán)磷鳥(niǎo)苷(cGMP)免疫試劑盒

Arenibacter certesii 胚胎干相關(guān)蛋白FOPNL抗體Human Appbp2(Amyloid protein-binding protein 2) ELISA Kit綿羊花生四烯(AA)免疫試劑盒

魯能鎖擲孢酵母磷化癌基因FOS蛋白B抗體Human ANAPC2 (Anaphase-promoting complex subunit 2) ELISA KIT綿羊骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒

弗氏檸檬桿菌叉頭蛋白D2抗體Human ANK1(Ankyrin-1) ELISA Kit綿羊睪(T)免疫試劑盒

卷枝毛霉叉頭蛋白E3抗體Human ANLN (Actin-binding protein anillin) ELISA KIT綿羊甘油-3-磷脫氫(GAPDH)免疫試劑盒

運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌叉頭蛋白F2抗體Human ANKFY1 (Rabankyrin-5) ELISA KIT綿羊肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)免疫試劑盒

根瘤菌叉頭蛋白H1抗體Human Appbp2(Amyloid protein-binding protein 2) ELISA Kit綿羊肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)免疫試劑盒

黃曲霉叉頭蛋白I1抗體Human ANAPC2 (Anaphase-promoting complex subunit 2) ELISA KIT綿羊酯化脂肪(NEFA)免疫試劑盒

紫云英根瘤菌磷化叉頭蛋白4抗體Human AIF1L (Allograft inflammatory factor 1-like) ELISA KIT綿羊二受體(ER-Alpha)免疫試劑盒

Staphylococcus│aureus 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,>99.5%莰烯

: CBS158.86資源名稱: 釀酒酵母 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC, ≥99.5% (GC)L-蛋（硫)

肉蘑(血紅鉚釘菇)Chroogomphus│rutilus (Schaeff.) O.K. Mill. 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99.7%(GC)DL-蛋（硫)
Sorensen磷酸緩沖液Human Acylation Stimulating Protein,ASP ELISA Kit  人?；碳さ鞍滓?guī)格： 48T

Human bactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPI ELISA Kit  人殺jun性/通透性增加蛋白規(guī)格： 48T

Human matrix extracellular phosphoglycoprotein,MEPE ELISA Kit  人細(xì)胞外基質(zhì)磷suan糖蛋白規(guī)格： 48T

Human replication protein A,RPA-70 ELISA Kit  人復(fù)制蛋白A規(guī)格： 48T

Human cartilage oligomeric matrix protein,COMP ELISA Kit  人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve）,，即劑量反應(yīng)性曲線,，來(lái)確定最佳篩選濃度,。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL,；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL,；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度,。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜,；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型,，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50,，100,，250，500,，750,，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液,。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔,。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度,。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度,。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）,。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷,。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低,。為了得到較好的篩選效果,，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染,，以及篩選效果,。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。