商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義:Ca++ Mg++-ATP酶廣泛分布于植物,、動(dòng)物、微生物和細(xì)胞中,,可催化ATP水解生成ADP和無(wú)機(jī)磷,。測(cè)定原理:根據(jù)Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷,通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)確定ATP酶活性高低。需自備的儀器和用品:可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽、冰和蒸餾水,。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,,4℃保存,;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存,;試劑二:液體3 mL×1瓶,,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,,-20 ℃保存,,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,,用不完的試劑4℃保存一周,;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,,用時(shí)加入3mL蒸餾水,,混勻,用不完的試劑4℃保存一周,;試劑五:液體3.6mL×1瓶,,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,,4 ℃保存,;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存,。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī)、移液器,、1 ml玻璃比色皿,、研缽、冰和蒸餾水,。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),,加入1ml酸性提取液),,95℃水浴5min(蓋緊,,以防止水分散失),; 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,置冰上待測(cè),。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),,95℃水浴5min(蓋緊,,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,取上清,,置冰上待測(cè),。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),,冰浴研磨,,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),;冰浴 中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,,加入500μl堿性提取液使之中和,,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,,置冰上待測(cè),。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,,加入1ml堿性提取液),,冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,,以防止水分散失),;冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,置冰上待測(cè),。 | 3,、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),,棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液),, 超聲波破碎(冰浴,,功率20%或200W,超聲3s,,間隔10s,,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,,以防止水分散失),;冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,置冰上待測(cè),。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),,棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液),, 超聲波破碎(冰浴,,功率20%或200W,超聲3s,,間隔10s,,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,,以防止水分散失),;冰浴中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,取上清,,置冰上待測(cè),。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,,蒸餾水調(diào)零,。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水,、800μL試劑二和100μL試劑四,,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,,分別記為A1和A2,。△A空白管=A1-A2,。,。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4,?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次,。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子,。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。
鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Roxatidine acetate HCl動(dòng)力蛋白激活蛋白亞基3抗體包裝500mg
鹽昂丹司瓊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pemetrexed動(dòng)力蛋白激活蛋白6抗體包裝1g
鹽奧洛他定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pemetrexed脫2抗體包裝25g
鹽奧昔布寧(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: sulphadoxine磷化DNA依賴性蛋白激抗體包裝5g
鹽奧昔布寧(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: sulphadoxine防御α4抗體包裝1g
鹽貝凡洛爾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Penicillin G, sodium salt DNA損傷結(jié)合蛋白1抗體包裝25g
鹽貝那普/那普(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Penicillin G, sodium salt DNA損傷結(jié)合蛋白2抗體包裝5g
鹽貝那替(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Mitiglinide calcium HydrateCD299抗體包裝25g
鹽貝尼地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Mitiglinide calcium HydrateC型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員A抗體包裝5g
鹽倍他司(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: PropylthiouracilC型凝集結(jié)構(gòu)域家族6成員A抗體包裝25g
鹽達(dá)莫司(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Fluorometholone AcetateB淋巴銜接分子DAPP1抗體包裝5g
鹽海明(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pentabromophenyl etherDNA1樣蛋白1抗體包裝100ml
鹽海索(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 3-Amino-3-azabicyclo[3.3.0]octane hydrochloride抗菌蛋白DCD抗體包裝25g
鹽環(huán)壬酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Kasugamycin肌動(dòng)蛋白解聚因子抗體包裝5g
鹽環(huán)壬酯雜質(zhì)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tulathromycin A甘油二酯?;D(zhuǎn)移2抗體包裝25g
野油菜黃單胞菌Xanthomonas│campestris 質(zhì)量規(guī)格:>98%,一合物USP,BR拓樸異構(gòu)Ⅱ試劑盒山柰-3-O-蕓香糖苷;Kaempfe
: I-3北京制藥廠資源名稱: 氧化葡糖桿菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品脫氧皮質(zhì)試劑盒;Kaempferide
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BP,BR,可用于培養(yǎng)脫氧尿三磷試劑盒仙苷;Narcissoside
Ca++Mg++ ——ATP酶測(cè)試盒100管/48樣釀酒酵母 2-乙氧烯14-3-3thetaElisa
異常漢遜酵母 異基乙烯基14-3-3zetaElisa
地中海中慢生根瘤* N-(2-乙基)-N-苯轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2Elisa
慢生根瘤 甲磺酸異酯TitinElisa
青黃褐硬皮馬勃 癸二酰肼抗通透性增高蛋白抗體Elisa
釀酒酵母 5-硝基糠二乙酸酯組蛋白乙?;疕2Elisa
膠孢 N-乙基-N-苯組蛋白乙酰化H3Elisa
多主葡萄殼 3-(N,N-二甲基氨基)烯酸乙酯α3神經(jīng)節(jié)乙酰受體抗體Elisa
蜜蜂生球擬酵母 丁二酸二異酯甲腺原脫ⅠElisa
米川黃桿 乙酸乙酯甲腺原脫ⅡElisa
滑假絲酵母 1-丁基十氫萘25羥基維生D-1α羥化,線粒體Elisa
慢生根瘤 5-溴-2-異酸酯1,25-二羥維生D(3)24-羥化,,線粒體Elisa
黃赭色鏈霉 2-羥基-4-氧雜三環(huán)[4,2,1,0 37]-5-壬酮可溶性CD23Elisa
米根霉 2,3,5,6-四氟對(duì)苯二甲抗含干擾誘導(dǎo)解旋C域蛋白1抗體Elisa
食砜節(jié)桿 4-吡啶乙鹽酸鹽腦型肌酸激Elisa