試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,,4℃保存,;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存,;試劑一:液體10 mL×1瓶,,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,,4℃保存,;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,,混勻,,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,,4 ℃保存,,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,,用不完的試劑4℃保存一周,;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存,;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存,;試劑七:液體50mL×1瓶,,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī),、移液器、1 ml玻璃比色皿,、研缽,、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,,催化葡萄糖-1-磷酸與ATP反應(yīng)生成淀粉合成的直接前體ADPG,,是植物淀粉生物合成的主要限速步驟。 測(cè)定原理AGP催化的逆向反應(yīng)生成G1P,,在反應(yīng)體系中添加的磷酸己糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,,340nm下測(cè)定NADPH增加速率,即可計(jì)算AGP活性,。需自備的的儀器和用品紫外分光光度計(jì),、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、1 mL石英比色皿、研缽,、冰和蒸餾水 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),,加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,,以防止水分散失),; 冰浴中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,,加入500μl堿性提取液使之中 和,,混勻,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),,加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,,以防止水分散失),; 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,置冰上待測(cè),。 | 2,、組織中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,,95℃水浴5min(蓋緊,,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,取上清,,置冰上待測(cè),。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),,冰浴研磨,,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),;冰浴 中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,,加入500μl酸性提取液使之中和,, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,,置冰上待測(cè)。 | 3,、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),,棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液),, 超聲波破碎(冰浴,,功率20%或200W,超聲3s,,間隔10s,,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,,以防止水分散失),;冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,置冰上待測(cè),。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液),, 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,,間隔10s,,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,,以防止水分散失),;冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,置冰上待測(cè),。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零,。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min,。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2,?!鰽空白管=A1-A2。,。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液,、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4,。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。
2''-O-p-反式香豆酰基葒草苷英文名: Boc-Val-OH葡萄糖氧化1抗體包裝1g
2''-O-p-香豆?;登G英文名: Boc-Asn-OH轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子HOXD9抗體包裝5g
2''-O-鼠李糖基羊藿次苷II英文名: Boc-Gln-OH羥基酰解樣蛋白抗體包裝1g
2'-O-基苦參英文名: Boc-Ala-OSu熱休克蛋白受體家族蛋白7B2抗體包裝25g
2,3,5,4-四羥基二乙烯葡萄糖苷,二乙烯苷英文名: Boc-D-Ala-OHHeme結(jié)合蛋白2抗體包裝5g
2,3,5,4-四羥基二乙烯葡萄糖苷,二乙烯苷(標(biāo)...英文名: Boc-?-Ala-OH肝粘附分子2抗體包裝1g
2,3-脫氫維英文名: Boc-?-iodo-Ala-OMe基己糖苷D抗體包裝5g
2,5,9-三羥基-4-氧基-9,10-二氫菲英文名: Boc-Arg-OH·HCl·H2OHHLA2蛋白抗體包裝1g
20(21)-脫氫赤芝A英文名: Nalpha-BOC-D-Arginine hydrochloride hydrate羥脯抗體包裝250mg
20(S)-原人參三(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Boc-Arg(Mts)-OH·CHA熱休克蛋白10抗體包裝5g
21-O-順芷酰基匙羹藤新苷元英文名: Boc-Arg(NO2)-OH同源盒蛋白PRH抗體包裝1g
23-羥基龍吉苷元英文名: Boc-N-beta-Trityl-L-asparagine 羥類(lèi)固脫氫17β抗體包裝5g
23-乙酰去氫澤瀉B英文名: Boc-Asn-(Xan)-OH皰疹病相關(guān)泛特異性蛋白7抗體包裝1g
23-乙酰澤瀉B,;澤瀉B醋酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Boc-L-Asp(OBzl)-OH同源異型盒基因HOXA5蛋白抗體包裝5g
24-乙酰澤瀉F英文名: Boc-L-Asp(OcHex)OH異染色質(zhì)蛋白1-α(HP1α)抗體包裝1g
AS2.14資源名稱(chēng): 釀酒酵母 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%磷烯羧激,線粒體試劑盒6-姜烯;6-Shogaol
巨型艾耳球蟲(chóng)Eimeria│maxima 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%磷葡萄糖脫氫試劑盒10-姜;10-Gingerol
曲霉Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR磷PP2A癌性抑制物試劑盒氧醉椒 ;Yangonin
ADPG焦磷酸化酶(AGP)測(cè)試盒50管/48樣芽孢桿 2-雙環(huán)已基膦-2 ',6'-二異氧基聯(lián)苯亞硝酸還原Elisa
臭曲霉 庚基-β-D-吡喃葡萄糖苷甘脫羧Elisa
茄鐮孢 2--3-吡啶絲乙酸轉(zhuǎn)氨Elisa
交鏈孢屬 3,5-雙(三氟甲基)苯甲酰甘甜菜堿Elisa
假絲酵母屬 4,、4'-二氨基苯酰替苯嘔吐Elisa
大豆慢生根瘤 (S)-2,5-二氫-3,,6-二甲氧基-2-異基吡乙酰乳酸合成Elisa
雙孢蘑菇 1-乙炔基-1-環(huán)己還原態(tài)煙酰腺二核苷酸磷酸Elisa
空腸彎曲桿 L-羥鈷氧化態(tài)煙酰腺二核苷酸磷酸Elisa
煙色毛霉 N,N'-雙芴甲氧羰基-L-賴GDP-L-半乳糖磷酸Elisa
Gillisia limnaea 4,5-二氟-2-GDP-D-甘露糖焦磷酸化Elisa
大腸埃希 硫酰幾丁質(zhì)Elisa
柳巴克酵母 水合肼 一水合物谷脫羧Elisa
德?tīng)柌加墟呓湍?/span> 高酸鈉 一水合物γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨Elisa
綠針假單胞 化鈰(III)葡萄糖焦磷酸化Elisa
黃多孔 鎢酸鎘淀粉分支Elisa