NP-40裂解液公司正在銷售的產(chǎn)品：Bacillus cereus人白介素受體相關(guān)激酶
Bacillus cereus人尿激酶
Bacillus cereus人磷酸烯式酮酸羧激酶
Bacillus cereus人胰蛋白酶
Bacillus cereus人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1
Bacillus cereus人蛋白二硫化物異構(gòu)酶前體
Bacillus cereus人蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3

產(chǎn)品分類：蛋白提取

儲(chǔ)存條件：—20℃,12個(gè)月

用途：溫和裂解細(xì)胞提取總蛋白質(zhì),主要用于Western,免疫沉淀,免疫共沉淀等

注意事項(xiàng)：主要由NP-40,、氯化鈉,、Tris組成,NP-40為常用的去污劑之一。含有一支1.5ml PMSF,。用本裂解液得到的蛋白樣品,，可以用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度,。

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定,、靈敏度高,、操作簡單、易保存等特點(diǎn),，咨詢并訂購,！

 

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因,；

EDTA是四元酸,，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示,，溶解度很小,，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2,、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈,，烘干,。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min,，再用自來水、純水洗凈,，烘干,、冷卻。

2,、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn,，蓋好小表面皿,。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,，待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,，用純水稀釋至標(biāo)線,，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量,，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱,；柱溫120℃,；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃,；分流進(jìn)樣，分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000,。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存,，一份置室溫中保存,，在第1、3,、7,、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液,。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量,。記錄下來,，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠,。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,，推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線,，來確定最佳篩選濃度,。

一般而言,，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL,；真菌300-1000μg/mL,。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn),，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,，37℃,，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,，可增加接種量,。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,，可設(shè)定50，100,，250,，500，750,，1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液,。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基,，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔,。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基,。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度,。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后,，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷,。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,，這取決于宿主細(xì)胞類型,，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果,。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。

中國克魯維酵母淋巴管內(nèi)皮和血管內(nèi)皮受體1抗體Anti-Ferritin Antibody血栓烷受體(TP)

露濕漆斑菌鞭毛蛋白2抗體Anti-FES Antibody血栓A2(TXA2)

硬結(jié)節(jié)桿菌跨膜蛋白SEMA5A抗體Anti-FFAR1 Antibody血色病蛋白(HFE)

香菇IQCJ抗體Anti-FGA Antibody血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)

糞腸球菌*SH2結(jié)構(gòu)域蛋白C3抗體Anti-FGA Antibody血清淀粉樣P物質(zhì)(SAP)

日本色鹽桿菌2型豬鏈球菌溶血抗體Anti-FGB Antibody血漿過氧化物(GPX3)

解鳥克雷伯菌肺表面活性蛋白A抗體Anti-FGF1 Antibody血紅氧合2(HO2)

綠色鏈霉菌肺表面活性蛋白A抗體Anti-FGF1 Antibody血紅氧合1(HO1)

多粘類芽孢桿菌葡萄糖-6磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體Anti-FGF1 Antibody血紅結(jié)合蛋白(HPX)

枯草芽孢桿菌線粒體琥珀脫氫D抗體Anti-FGF1 Antibody血紅蛋白μ(HBμ)

叢毛紅曲類固硫酯抗體Anti-FGF10 Antibody血紅蛋白θ1(HBθ1)

腐質(zhì)霉固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白抗體Anti-FGF10 Antibody血紅蛋白ζ(HBζ)

傘枝犁頭霉轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族39成員7抗體Anti-FGF13 Antibody血紅蛋白ε1(HBε1)

迪吉氏黃桿菌碳?xì)溻c協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A4突變型抗體Anti-Fgf19(Fgf15) Antibody血紅蛋白δ(HBδ)

木賊鐮刀菌磷化認(rèn)知缺陷突觸相關(guān)蛋白SynGAP抗體Anti-FGF19 Antibody血紅蛋白γ2(HBγ2)

Sphingobium fuliginis Syndecan 3蛋白抗體Anti-FGF19 Antibody血紅蛋白γ1(HBγ1)

染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白2抗體空腸彎曲菌hFoB1.19:SV40轉(zhuǎn)染人成骨細(xì)胞

染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白5抗體液化MGC80-3人胃癌細(xì)胞

染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白6抗體黑曲霉 ACHN人腎癌細(xì)胞

SLAMF6抗體淺白隱球酵母3T3-L1小鼠脂肪細(xì)胞
NP-40裂解液（0.25%）乙二胺四乙酸混合液100毫升人皮膚成纖維,；CCC-HSF-1Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

乙二胺四乙酸（EDTA）細(xì)胞脫離溶液100毫升人羊膜,；WISHEB病IgA（EBv IgA）ELISA試劑盒--動(dòng)物,，人

Hanks平衡鹽緩沖溶液（HBSS）500毫升人胚肺成纖維；CCC-HPF-1登革熱（DF-Ab）ELISA試劑盒--動(dòng)物,，人

Hanks鈣鎂平衡鹽緩沖溶液（HBSS）500毫升人胚皮膚成纖維,；CCC-ESF-1小鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）ELISA試劑盒,