鉛鹽染色液公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：綿羊骨堿性磷酸酶(BALP)試劑盒 Anti-GP5 Antibody溴脫氧尿苷
綿羊谷脫羧酶抗體(GAD-Ab/Anti-GAD)試劑盒Anti-GPAT3 Antibodyβ淀粉樣肽29-40(野生型)
綿羊胰脂肪酶(PL)試劑盒 Anti-GPAT3 Antibody三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2
綿羊α1連接素(CTNNα1)試劑盒Anti-GPC3 A

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產(chǎn)品分類(lèi)：金屬及鹽染色

儲(chǔ)存條件：室溫,避光,12個(gè)月

用途：鉛染色

注意事項(xiàng)：又稱(chēng)玫瑰紅酸鈉,、Rhodizonate法,該法常用,鉛鹽呈黑色,避免采用含汞的固定液,。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸,，是一種白色晶體粉末,，常用H4Y表示，溶解度很小,，室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,，然后用水洗凈，烘干,。

配制步驟：

1,、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min,，再用自來(lái)水,、純水洗凈，烘干,、冷卻,。

2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15～0.2g Zn,，蓋好小表面皿,。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,，待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,，用純水稀釋至標(biāo)線(xiàn),，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量,，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃,；進(jìn)樣口溫度250℃,；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣,，分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液,，一份置冷處保存,，一份置室溫中保存，在第1,、3,、7、10,、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量,。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠,。

香菇死亡相關(guān)蛋白6/Fas死亡區(qū)相關(guān)蛋白抗體Human LARP7(La-related protein 7) ELISA Kit人單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)免疫試劑盒

木生炭角菌動(dòng)力蛋白2抗體Human DDX42(ATP-dependent RNA helicase DDX42) ELISA Kit人單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒

冷海水黃桿菌防御β2/Defensin β2抗體Human COL10A1(Collagen alpha-1(X) chain) ELISA Kit人單純皰疹病抗原-1(HSV-Ag1)免疫試劑盒

杏鮑菇多巴受體相互作用蛋白5抗體Human SORD(Sorbitol dehydrogenase) ELISA Kit人單純皰疹病Ⅱ型抗體IgM(HSVⅡ-Ab)免疫試劑盒

乳酒假絲酵母性發(fā)育轉(zhuǎn)錄因子蛋白DMO抗體Human ZEB1(Zinc finger E-box-binding homeobox 1) ELISA Kit人單純皰疹?、蛐涂贵wIgG(HSVⅡ-Ab)免疫試劑盒

側(cè)耳無(wú)胸腺癥關(guān)鍵蛋白6樣抗體（迪格爾格綜合征）Human DTNBP1(Dysbindin) ELISA Kit人單純皰疹?、裥?HSVⅠ)抗體(IgM)免疫試劑盒

蠟蚧菌軸絲動(dòng)力蛋白10抗體Human MTOR(Serine/threonine-protein kinase mTOR) ELISA Kit人單純皰疹病Ⅰ型(HSVⅠ)抗體(IgG)免疫試劑盒

釀酒酵母D型天冬抗體Human ZEB2(Zinc finger E-box-binding homeobox 2) ELISA Kit人單純皰疹?、?Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗體(IgM)免疫試劑盒

繡球菌*DYDC1蛋白抗體Human OTC(Ornithine carbamoyltransferase, mitochondrial) ELISA Kit人單純皰疹?、?Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗體(IgG)免疫試劑盒

根瘤菌屬二氫嘧啶抗體Human CA3(Carbonic anhydrase 3) ELISA Kit人單氧化(MAO)免疫試劑盒

黑腐皮殼脫磷結(jié)構(gòu)域蛋白抗體Human ISG15(Ubiquitin-like protein ISG15) ELISA Kit人帶3蛋白(Band3)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌DCST1蛋白抗體Human AMFR(E3 ubiquitin-protein ligase AMFR) ELISA Kit人大皰性類(lèi)天皰瘡抗體(BP)免疫試劑盒

黑曲霉DCUN1D4蛋白抗體Human DDX42(ATP-dependent RNA helicase DDX42) ELISA Kit人大內(nèi)皮(Big ET-1)免疫試劑盒

土生類(lèi)諾氏菌脫氧輔合蛋白抗體Human OCLN(Occludin) ELISA Kit人大腸癌專(zhuān)一抗原4(CCSA-4)免疫試劑盒

鏈霉菌短鏈脫氫/還原家族4樣2蛋白抗體Human LARP7(La-related protein 7) ELISA Kit人大腸癌專(zhuān)一抗原3(CCSA-3)免疫試劑盒

無(wú)花果曲霉DDRGK1蛋白抗體Human COL10A1(Collagen alpha-1(X) chain) ELISA Kit人大腸癌專(zhuān)一抗原2(CCSA-2)免疫試劑盒

副溶血弧菌Vibrio│parahaemolyticus 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于食品分析醋棉

幽門(mén)螺桿菌Helicobacter│pylori 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC)柚皮苷二氫查爾

灰平鏈霉菌Streptomyces│griseoplanus Backus et al. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品山姜
鉛鹽染色液ATM(Human Ataxia telangiectasia mutated) ELISA Kit  人毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基因規(guī)格： 48T

AhR(Human aryl hydrocarbon receptor) ELISA Kit  人芳香烴受體規(guī)格： 48T

SMAF(Human Specifie Macrophage Arming Paetot) ELISA Kit  人特異性巨噬細(xì)胞武裝因子規(guī)格： 48T

MF/MPF(Human maturation promoting factor) ELISA Kit  人促有絲分裂因子規(guī)格： 48T

ATF-1(Human activating transcription factor-1) ELISA Kit  人轉(zhuǎn)錄因子-1規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基,，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（kill curve）,，即劑量反應(yīng)性曲線(xiàn),，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言,，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL,；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL,。

2. 殺滅曲線(xiàn)的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,，可通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（劑量反應(yīng)曲線(xiàn)）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度,。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜,；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50,，100,，250，500,，750，1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基,，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基,。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度,。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后,，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）,。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,，其效率會(huì)降低,。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。

3）  篩選7天后觀(guān)察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型,，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果,。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。