化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠,、效果穩(wěn)定,、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單,、易保存等特點(diǎn),，咨詢并訂購！
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
Laemmli加樣緩沖液 | 5ml | FS-R7466 |
產(chǎn)品分類：蛋白電泳
儲(chǔ)存條件：4℃,12個(gè)月
用途：變性不連續(xù)PAGE,，蛋白加樣緩沖液
注意事項(xiàng)：主要SDS,、氧化劑、溴酚藍(lán)等組成,。
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：
1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；
EDTA是四元酸,，是一種白色晶體粉末,，常用H4Y表示，溶解度很小,，室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,，然后用水洗凈，烘干,。
配制步驟：
1,、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min,，再用自來水,、純水洗凈,，烘干、冷卻,。
2,、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿,。
3,、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁,，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線,，搖勻,。
實(shí)驗(yàn)方法與判定：
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,，作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱,；柱溫120℃,；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃,；分流進(jìn)樣,，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000,。
4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液,，一份置冷處保存，一份置室溫中保存,，在第1,、3、7,、10,、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液,。照氣相色譜法,，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來,，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%,，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
金乳牛肝菌豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍(lán)耳病病抗體Anti-BAG3 Antibodyγ肽(Pγ)
澳型核果褐腐病菌凋亡相關(guān)蛋白10抗體Anti-BAG1 Antibodyγ谷酰轉(zhuǎn)移(GGT)
澳型核果褐腐病菌鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激磷抗體Anti-BAG1 Antibodyγ-谷酰環(huán)化轉(zhuǎn)移(GGCT)
門多薩假單胞菌絲/蘇蛋白激PIM3抗體Anti-BAG5 Antibodyγ谷酰半胱合成(γ-ECS)
蠟樣芽孢桿菌組蛋白精甲基轉(zhuǎn)移5抗體Anti-BAG5 Antibodyγ谷-半胱合成(γ-GCS)
熱帶假絲酵母原鈣粘附蛋白11X抗體Anti-BAG3 Antibodyγ干擾誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)
粉紅聚端孢霉原鈣粘附蛋白11Y抗體Anti-BAK(BAK1) Antibodyγ干擾誘導(dǎo)單核因子(MIGF/CXCL9)
暗褐色毛霉原鈣粘附蛋白12/血管內(nèi)皮鈣粘蛋白2抗體Anti-BAG6 Antibodyγ干擾受體(IFN-γR)
枯草芽孢桿菌原鈣粘附蛋白17抗體Anti-BAP1 Antibodyγ干擾(IFN-γ)
三葉草根瘤菌原鈣粘附蛋白1抗體Anti-BAX Antibodyγ干擾(IFNγ)
杰丁畢赤酵母原鈣粘附蛋白α1抗體Anti-BAK1 Antibodyγ分泌激活蛋白(PION)
深紅原鈣粘附蛋白α3抗體Anti-BAMBI Antibodyγ基丁(GABA)
金龜子綠僵菌原鈣粘附蛋白α4抗體Anti-BAX Antibodyβ-轉(zhuǎn)導(dǎo)重復(fù)序列包含蛋白(BTRC)
短乳桿菌原鈣粘附蛋白α5抗體Anti-BAX Antibodyβ抑制蛋白2(ARRB2)
發(fā)酵假絲酵母原鈣粘附蛋白α9抗體Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)
側(cè)毛殼原鈣粘附蛋白α7抗體Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白(β-TG)
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品,還原型
巴斯德畢赤酵母Pichia│pastoris 質(zhì)量規(guī)格：純度大于98%,BR
干酪乳桿菌假植物亞種Lactobacillus│casei subsp .pseudoplantarum 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
Laemmli加樣緩沖液Plant Vitamin D2,VD2 ELISA Kit 植物維生suD2規(guī)格： 48T
Plant Vitamin D3,VD3 ELISA kit 植物維生suD3規(guī)格： 48T
Plant Vitamin D,VD ELISA Kit 植物維生suD規(guī)格： 48T
Plant Vitamin B6,VB6 ELISA Kit 植物維生suB6規(guī)格： 48T
Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit 植物25羥基維生suD3規(guī)格： 48T
使用方法：
1. 常用篩選濃度
注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,，培養(yǎng)基,，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve）,，即劑量反應(yīng)性曲線,，來確定最佳篩選濃度。
一般而言,，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL,；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL,。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn),，至少選擇5個(gè)濃度,。
1） 第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃,，CO2培養(yǎng)過夜,；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量,。
2） 根據(jù)細(xì)胞類型,，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,，可設(shè)定50,，100，250,，500,，750,，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液,。
3） 第二天：替換舊的培養(yǎng)基,，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔,。
4） 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5） 按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度,。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度,。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1） 轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）,。
注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷,。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低,。為了得到較好的篩選效果,，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。
3） 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染,，以及篩選效果,。
4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。
5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。
化工儀器網(wǎng)