雙縮脲總蛋白試劑公司正在銷售的產品：Bacillus circulans人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
Bacillus circulans人L苯解氨酶
Bacillus circulans人5核苷酸酶
Bacillus circulans人1,3-βD葡葡糖苷酶
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Bacillus coagulans

公司產品僅用于科研具有質量可靠,、效果穩(wěn)定,、靈敏度高、操作簡單,、易保存等特點,，咨詢并訂購！

產品分類：蛋白檢測

儲存條件：室溫,12個月

用途：專門用于雙縮脲法蛋白定量,通過1,、 酶標儀或分光光度計進行蛋白的精確定量分析

注意事項：主要由硫酸銅,、酒石酸鈉、碘hua鉀等組成,。

 

 

配制與標定的實驗原理：

1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸,，是一種白色晶體粉末,，常用H4Y表示，溶解度很小,，室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層,，然后用水洗凈，烘干,。

配制步驟：

1,、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min,，再用自來水,、純水洗凈，烘干,、冷卻,。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn,，蓋好小表面皿,。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,，待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,，用純水稀釋至標線,，搖勻,。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,，作為對照品溶液,。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃,；進樣口溫度250℃,；檢測器溫度250℃；分流進樣,，分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液,，一份置冷處保存,，一份置室溫中保存，在第1,、3,、7、10,、15天重新配制一份對照品溶液,，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量,。記錄下來,，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,，驗證對照品溶液在使用期內穩(wěn)定可靠。

釀酒酵母周期蛋白SG2N抗體Anti-GAA Antibody心肌型蘭定受體2(RYR2)

考克氏菌STRN4蛋白抗體Anti-GAB1 Antibody心肌(MYOCD)

鉤狀木霉鈉離子通道蛋白7α/Na+ CP type VIIα抗體Anti-GABRA1 Antibody心肌肌鈣蛋白T(TNNT2)

平滑假絲酵母電壓門控鈉通道SCN3α蛋白/Na+ CP type IIIα抗體Anti-GABBR1 Antibody心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)

乳白耙菌神經元電壓門控鈉通道蛋白β2/Na+ CP type IIβ抗體Anti-GAD1 Antibody心肌肌動蛋白α1(ACTC1)

金頂側耳紅膜蛋白STOM抗體Anti-GABRB3 Antibody心肌鈣黏蛋白(CDHH)

短小芽孢桿菌鈉依賴性脯轉運PROT抗體Anti-GAD1 Antibody斜方蛋白1(RHOM1)

釀酒酵母基轉運蛋白2抗體Anti-GAD2 Antibody小異二聚體伴侶(SHP)

紫丁香蘑溶質載體蛋白家族35成員C2抗體Anti-GAD2 Antibody小亞基鈣蛋白1(CAPNS1)

中國臺灣根霉轉綠激活蛋白SRCAP抗體Anti-GADD45A Antibody小蛋白γ(PARVγ)

放射形根瘤菌上皮特異性ETs轉錄因子抗體Anti-GAD2 Antibody小蛋白β(PARVβ)

污黑腐皮殼纖溶原激活物抑制因子2/血漿原激活抑制因子-2抗體Anti-GADD45A Antibody小蛋白α(PARVα)

華麗側耳 (佛羅里達側耳)SLFNL1抗體Anti-GADD45G Antibody小腦肽4(CBLN4)

鏈球菌(不定種)SCN2A抗體Anti-Galactosidase alpha/Gla Antibody小腦肽3(CBLN3)

側耳SEL1L抗體Anti-GAL Antibody小腦肽2(CBLN2)

巴博乳桿菌SCN1A抗體Anti-Galectin 2/LGALS2 Antibody小腦肽1(CBLN1)

鈉碘轉運體蛋白8抗體膠質芽胞桿菌人椎間盤髓核細胞

組蛋白甲基轉移SMYD4抗體煙草節(jié)桿菌人滑膜細胞

絲/蘇蛋白激38抗體毛頭鬼傘（雞腿菇）人骨骼肌衛(wèi)星細胞

分選連接蛋白1抗體離褶傘（松毛菇）人肺大靜脈平滑肌細胞
雙縮脲總蛋白試劑細胞培養(yǎng)污染性支原體M.arginini鑒定16S rDNA20次人胚肺成纖維,；HFL1小鼠催產（OT）ELISA試劑盒,

PCR擴增檢測試劑盒人胚腎,；293 [HEK-293]小鼠抑瘤M（OSM）ELISA試劑盒,

細胞培養(yǎng)污染性支原體A.laidlawii鑒定16S rDNA20次人羊膜；HA小鼠中性粒彈性蛋白酶（NE）ELISA試劑盒,

PCR擴增檢測試劑盒人胚肺成纖維,；HFL-I小鼠抗受體（ATR）ELISA試劑盒,

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化,，推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線,，來確定最佳篩選濃度,。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL,；細菌/植物細胞20-200μg/mL,；真菌300-1000μg/mL,。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現(xiàn),，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,，37℃,，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞,，可增加接種量,。

2）  根據(jù)細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度,。以哺乳動物細胞為例,，可設定50，100,，250,，500，750,，1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液,。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基,，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔,。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基,。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度,。

3.   穩(wěn)定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后,，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷,。則當細胞過于稠密,，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,，這取決于宿主細胞類型，轉染,，以及篩選效果,。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。