商品介紹:
測(cè)定意義 LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),,伴隨著NAD+/NADH之間互變。 測(cè)定原理 LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比,。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計(jì),、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器,、1 mL玻璃比色皿、研缽,、冰和蒸餾水,。 |
商品屬性:
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,,4℃保存,;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存,;試劑二:液體3 mL×1瓶,,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,,-20 ℃保存,,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,,用不完的試劑4℃保存一周,;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,,用時(shí)加入3mL蒸餾水,,混勻,用不完的試劑4℃保存一周,;試劑五:液體3.6mL×1瓶,,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,,4 ℃保存,;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存,。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī)、移液器,、1 ml玻璃比色皿,、研缽、冰和蒸餾水,。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),,加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,,以防止水分散失),; 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,,加入500μl堿性提取液使之中 和,,混勻,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),,加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,,以防止水分散失),; 冰浴中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,取上清,,置冰上待測(cè),。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),,冰浴研磨,,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),;冰浴 中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,,加入500μl堿性提取液使之中和,,混勻,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,,95℃水浴5min(蓋緊,,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,置冰上待測(cè),。 | 3,、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),,棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液),, 超聲波破碎(冰浴,,功率20%或200W,超聲3s,,間隔10s,,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,,以防止水分散失),;冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,置冰上待測(cè),。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液),, 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,,超聲3s,,間隔10s,重復(fù)30次),,95℃水浴5min (蓋緊,,以防止水分散失),;冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,置冰上待測(cè),。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零,。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min,。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,,分別記為A1和A2,。△A空白管=A1-A2,。,。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4,?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次,。
乙型肝炎e抗原(HBeAg)英文名:HBeAg ELISA KitADCK1蛋白抗體包裝25g
乙型肝炎e抗體(HBeAb)英文名:HBeAb ELISA Kit?;Y(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體包裝5g
乙酰(acetyl-CoA)英文名:acetyl-CoA ELISA Kitα/β解4抗體包裝1g
乙酰轉(zhuǎn)移(CHAT)英文名:CHAT ELISA KitADCK2蛋白抗體包裝250mg
乙酰酯(AchE)英文名:AchE ELISA Kit乙脫氫16家庭A1抗體包裝1g
乙酰受體抗體(AChRab)英文名:AChRab ELISA Kit粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝1g
乙酰(ACH)英文名:ACH ELISA Kit乙脫氫1抗體包裝250mg
胰脂肪(PL)英文名:PL ELISA Kitδ基乙酰脫抗體包裝1g
胰激肽原(PK)英文名:PK ELISA Kit肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體包裝500mg
胰高血糖樣肽2(GLP-2)英文名:GLP-2 ELISA Kitα2巨球蛋白(α-2M)抗體包裝250mg
胰高血糖樣肽1(GLP-1)英文名:GLP-1 ELISA KitACCSL蛋白抗體包裝500mg
胰高血糖(GC)英文名:GC ELISA Kit胎蛋白抗體包裝100mg
胰淀(Amylin)英文名:Amylin ELISA Kitβ淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體包裝25g
胰島細(xì)胞抗體(ICA)英文名:ICA ELISA Kit星形肌動(dòng)蛋白抗體包裝1g
胰島自身抗體(IAA)英文名:IAA ELISA Kit系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體包裝5g
激活受體2A抗體胱天蛋白14(CASP14)Selumetinib (AZD6244) is a potent, highly selective MEK1 inhibitor with IC50 of
乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒50管/24樣茶樹菇 歐前胡B類清道夫受體1Elisa
圍小叢殼 白樺脂酸B-趨化因子1Elisa
乳桿屬 白樺脂B活化因子Elisa
假單胞屬 酪B瘤-XLElisa
栗疫 諾米林B瘤因子2Elisa
釀酒酵母 延胡索乙B瘤因子6Elisa
東方伊薩酵母 羅通定C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白1Elisa
海蘇特氏 蘆竹堿Ca-ATPElisa
節(jié)桿屬 番茄紅cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白Elisa
葡萄座腔 順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯CC趨化因子受體1Elisa
枯草芽孢桿 他唑巴坦CC趨化因子受體2Elisa
鰻斯頓氏 蘆薈大黃CC趨化因子受體5Elisa
尖鐮孢(尖孢鐮刀 )(可定) 血平CD100分子Elisa
粒狀青霉 莨菪堿CD133分子Elisa
三孢布霉 氧化苦參堿CD146分子Elisa
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用,。