詳細介紹
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠,、效果穩(wěn)定,、靈敏度高、操作簡單,、易保存等特點,,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
變性鮭魚精DNA | 1ml | FS-R7397 |
產(chǎn)品分類:核酸雜交
儲存條件:—20℃,12個月
用途:核酸雜交
注意事項:由鮭魚精DNA和DEPC處理水等組成,,已做加熱變性處理,,可直接使用。
配制與標定的實驗原理:
1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因,;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,,常用H4Y表示,,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。
2,、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,,然后用水洗凈,,烘干。
配制步驟:
1,、取適量鋅片放在100mL燒杯中,,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水,、純水洗凈,,烘干、冷卻,。
2,、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿,。
3,、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁,,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,,搖勻,。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液,。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱,;柱溫120℃;進樣口溫度250℃,;檢測器溫度250℃,;分流進樣,分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,,一份置冷處保存,,一份置室溫中保存,在第1,、3,、7、10,、15天重新配制一份對照品溶液,,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量,。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠,。
芽胞桿菌ATCC 9372;(曾用名:枯草芽胞桿菌黑色變種)單酰甘油脂肪抗體Human SESN1(Sestrin-1) ELISA Kit尿肽(KP)
枯草芽孢桿菌致癌基因n-Myc抗體Human GHRH(Somatoliberin) ELISA Kit冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白(CIRBP)
戊糖乳桿菌多藥耐藥相關(guān)蛋白3抗體Human CGB(CGβ(Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit) ELISA Kit冷球蛋白(CG)
枯草芽孢桿菌線粒體轉(zhuǎn)錄終止因子1抗體Human TAGLN2(Transgelin-2) ELISA Kit類粘蛋白2(ORM2)
拱狀靈芝蛋白激MST2抗體Human SFRP2(Secreted frizzled-related protein 2) ELISA Kit類粘蛋白(ORM)
*灰葡萄孢DNA結(jié)合蛋白C抗體Human IFNGR1(Interferon gamma receptor 1) ELISA Kit類似60S核糖體蛋白L21(LOC382344)
Chitinophagaceae sp.胃粘液抗體Human SULF2(Extracellular sulfatase Sulf-2) ELISA Kit類肌腱蛋白c(TNC)
巴氏醋桿菌巴氏亞種促黑激γ抗體Human CSTA(Cystatin-A) ELISA Kit類肌腱蛋白(TN)
阪崎腸桿菌抗體Human NAA20(N-alpha-acetyltransferase 20) ELISA Kit類固抗體(SCA)
類干酪乳桿菌結(jié)腸癌相關(guān)蛋白MIC1抗體Human HBA1(Hemoglobin subunit alpha) ELISA Kit類風濕因子(RF)
囊狀匐柄霉組織相容性復(fù)合體β抗體Human STEAP1(Metalloreductase STEAP1) ELISA Kit類白抗原G(HLA-G)
香菇Myc基因肺癌相關(guān)蛋白抗體Human HIF1AN(Hypoxia-inducible factor 1-alpha inhibitor) ELISA Kit類白抗原E(HLA-E)
蘇云金芽孢桿菌糖蛋白gp330抗體Human TAGLN2(Transgelin-2) ELISA Kit類白抗原C(HLA-C)
人參土地桿菌磷化肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體Human SESN1(Sestrin-1) ELISA Kit類白抗原B27(HLA-B27)
Rhizobium vitis造血祖激1抗體Human GHRH(Somatoliberin) ELISA Kit類白抗原A(HLA-A)
大腸埃希氏桿菌絲裂原活化蛋白激MAP4K4抗體Human PDE4B(cAMP-specific 3′,5′-cyclic phosphodiesterase 4B) ELISA Kit雷帕霉靶蛋白(mTOR)
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR楊苷
型副傷菌Salmonella│paratyphiA 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
木霉Trichoderma│sp. 質(zhì)量規(guī)格:BR,,日本分裝麝香
變性鮭魚精DNA(Mouse mammary carcinoma Marker-CA153) ELISA Kit 小鼠癌標志物-CA153規(guī)格: 48T
(Mouse Gastrointestinalcancer Marker-CA199) ELISA Kit 小鼠胃腸癌標志物CA199規(guī)格: 48T
HO-1(Mouse heme oxygenase 1) ELISA Kit 小鼠血紅su氧合mei1規(guī)格: 48T
PL-A2(Mouse Phospholipidase A2) ELISA Kit 小鼠磷脂meiA2規(guī)格: 48T
TFPI(Mouse Tissue factor pathway inhibitor) ELISA Kit 小鼠組織因子途徑抑制物規(guī)格: 48T
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,,推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,,來確定最佳篩選濃度,。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL,;細菌/植物細胞20-200μg/mL,;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度,。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,,37℃,,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,,可增加接種量,。
2) 根據(jù)細胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動物細胞為例,,可設(shè)定50,100,,250,,500,750,,1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液,。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔,。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基,。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度,。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷,。則當細胞過于稠密,,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,,以及篩選效果,。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。