產(chǎn)品分類:細胞其他
儲存條件:4℃,3個月
用途:用于哺乳動物(或人)細胞離體實驗,肌體灌流,、清洗組織,,并維持離體組織的正常生理功能
注意事項:無菌溶液,主要由2.5%氯化銨,、葡萄糖,、碳酸氫鈉等組成,注意防止細菌污染。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠,、效果穩(wěn)定,、靈敏度高、操作簡單,、易保存等特點,,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
復(fù)方氯化銨溶液 | 500ml | FS-R6610 |
配制與標(biāo)定的實驗原理:
1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因,;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,,常用H4Y表示,,溶解度很小,,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2,、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,,烘干,。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,,再用自來水、純水洗凈,,烘干,、冷卻。
2,、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,,蓋好小表面皿。
3,、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻,。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液,。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱,;柱溫120℃;進樣口溫度250℃,;檢測器溫度250℃,;分流進樣,分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000,。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,,一份置室溫中保存,,在第1,、3,、7,、10,、15天重新配制一份對照品溶液,,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量,。記錄下來,,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠,。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,,推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,,來確定最佳篩選濃度,。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL,;細菌/植物細胞20-200μg/mL,;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度,。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,,37℃,CO2培養(yǎng)過夜,;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動物細胞為例,可設(shè)定50,,100,,250,500,,750,,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液,。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔,。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基,。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度,。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷,。則當(dāng)細胞過于稠密,,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,,以及篩選效果,。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。
α-,細辛(標(biāo)準(zhǔn)品) Lithium sulfate表皮生長因子受體抗體包裝5g
α-香附(標(biāo)準(zhǔn)品) Sodium oleateEts轉(zhuǎn)錄因子家族ets1抗體包裝50mg
α-常春藤皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Tetramethylammonium chloride早期B淋巴因子1抗體包裝100g
β,β-二基烯酰阿寧(標(biāo)準(zhǔn)品) 1-Octanesulfonic acid, sodium salt內(nèi)皮受體A抗體包裝25g
β-桉葉(標(biāo)準(zhǔn)品) Calcium acetate, monohydrate表皮生長因子受體抗體包裝1g
β-谷甾 Calcium phosphate, tribasic表皮生長因子受體抗體包裝250mg
β-胡蘿卜(標(biāo)準(zhǔn)品) DL-Selenomethionine早期生長應(yīng)答蛋白1抗體包裝5g
β-欖香;β-嵐香(標(biāo)準(zhǔn)品) Melibiose表皮膜蛋白1抗體包裝1g
β-萘黃(標(biāo)準(zhǔn)品) Sodium oxalate內(nèi)皮受體蛋白酪激A抗體(腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白4)包裝25g
β-石竹烯(標(biāo)準(zhǔn)品) Sodium tungstate, dehydrate酪蛋白激A4抗體包裝5g
β-香樹(標(biāo)準(zhǔn)品) Succinic anhydride前列腺E受體3抗體包裝1g
β-乙酰氧基異戊酰阿寧 Tween-60雌激受體α抗體包裝5g
γ-基丁(GABA),標(biāo)準(zhǔn)品 Zymosan A from Saccharomyces cerevisiaeENPP3抗體IgG包裝25g
γ-倒捻子 Calcium sulfate, anhydrous絲裂原活化蛋白激1/2抗體包裝5g
(標(biāo)準(zhǔn)品) DCC, Dicyclohexylcarbodiimide胚胎干RAS蛋白抗體包裝1g
紅細菌Rhodobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%絲裂原活化蛋白激激6試劑盒20(S)-人參皂苷F2;20(S)-G
小多孢菌Micropolyspora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,PDK1 activator絲蟲病抗體試劑盒20(s)-人參皂苷F1;Ginseno
硫氧化檸檬胞菌Citreicella│thiooxidans 質(zhì)量規(guī)格:>98%絲肽抑制劑,Kazal 1型試劑盒人參三;Panaxatriol
復(fù)方氯化銨溶液Phospho-Syk (Tyr323) /FITC 熒光標(biāo)記化非受體型酪氨蛋白激IgG
Phospho-Syk (Tyr525/526) /FITC 熒光標(biāo)記化非受體型酪氨蛋白激IgG
SYT3/FITC 熒光標(biāo)記突觸結(jié)合蛋白3IgG
SAP-1/FITC 熒光標(biāo)記抗突觸IgG
Synapsin I /FITC 熒光標(biāo)記神經(jīng)突觸1IgG
Syntrophins/SNTA1/Syntrophin α1/FITC 熒光標(biāo)記神經(jīng)肌肉接頭蛋白SNTA1IgG
alpha-Synuclein/FITC 熒光標(biāo)記核突觸蛋白-α(C端)IgG
Synaptopodin/FITC 熒光標(biāo)記突觸蛋白synaptopodinIgG