產(chǎn)品分類:培養(yǎng)基
儲存條件 —20℃,12個月
用途 哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)中培養(yǎng)基的添加劑
注意事項(xiàng) 無菌溶液。按培養(yǎng)基:谷氨酸溶液=50:1使用,注意避免反復(fù)凍融,經(jīng)過濾除菌,。由于谷氨酸溶解度較低,,因此需要40~50℃溫水助溶,分裝后使用,。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠,、效果穩(wěn)定、靈敏度高,、操作簡單,、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購,!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
L-谷氨酸溶液 | 100ml | FS-R6450 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,,是一種白色晶體粉末,,常用H4Y表示,溶解度很小,,室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,,然后用水洗凈,烘干,。
配制步驟:
1,、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,,再用自來水,、純水洗凈,烘干,、冷卻,。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,,蓋好小表面皿,。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,,待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁,,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,,搖勻,。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,,作為對照品溶液,。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃,;進(jìn)樣口溫度250℃,;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,,分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對照品溶液,,一份置冷處保存,,一份置室溫中保存,在第1,、3、7,、10,、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液,。照氣相色譜法,,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,,驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,,培養(yǎng)基,,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),,即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度,。
一般而言,,哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL,;真菌300-1000μg/mL,。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),,至少選擇5個濃度,。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,,CO2培養(yǎng)過夜,;注:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量,。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例,,可設(shè)定50,,100,250,,500,,750,1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基,。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度,。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代),。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,,其效率會降低,。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。
3) 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,,這取決于宿主細(xì)胞類型,,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
谷半胱連接催化亞基(GCLC)GCLC ELISA Kit卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體包裝500mg
谷半胱連接(GCLM)GCLM ELISA Kit中心體蛋白55kDa抗體包裝5ml
孤啡肽(OFQ)OFQ ELISA Kit富含半胱與表皮生長因子樣蛋白2抗體包裝1g
高鐵血紅蛋白還原(MHBR)MHBR ELISA Kit骨架相關(guān)蛋白2/腫瘤和微管相關(guān)蛋白抗體包裝5g
高遷移率族蛋白1(HMG1)HMG1 ELISA Kit染色質(zhì)修飾蛋白4B(4C)抗體包裝1g
高密度脂蛋白(HDL)HDL ELISA Kit磷化受體酪激c-Abl抗體包裝250mg
高分子量激肽原(HMWK)HMWK ELISA Kit磷化受體酪激c-Abl抗體包裝1g
高爾基蛋白73(GP73)GP73 ELISA Kit磷化受體酪激c-Abl抗體包裝5g
干細(xì)胞因子受體(SCFR)SCFR ELISA Kit酪蛋白激1γ2抗體包裝10MG
干細(xì)胞因子(SCF)SCF ELISA Kit柯薩奇病蛋白受體B抗體包裝100g
干擾誘導(dǎo)T-細(xì)胞α亞族趨化劑(ITαC)ITαC ELISA Kit腫瘤抑制因子FBW7抗體包裝25g
干擾調(diào)節(jié)因子3(IRF3)IRF3 ELISA Kit粘附分子4抗體包裝5g
干擾γ誘導(dǎo)單核因子(MIγ)MIγ ELISA Kit鈣調(diào)蛋白結(jié)合轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體包裝10g
干擾γ(IFNγ)IFNγ ELISA Kit周期依賴性激5激活結(jié)合蛋白C53抗體包裝5g
干擾β(IFNβ)IFNβ ELISA Kit著絲粒蛋白H抗體包裝1g
中甸隔指孢Dactylella│zhongdianensis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR載脂蛋白C3試劑盒乙酰蒲公英萜;Taraxeryl ac
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品載脂蛋白C2試劑盒異古倫賓;IsocoluMbin
暫未定名Cystofilobasidium│infirmominiatum 質(zhì)量規(guī)格:進(jìn)分,Sigma C1768載脂蛋白C1試劑盒;6-Hydroxyindole
L-谷氨酸溶液IAA/FITC 熒光標(biāo)記-3-/植物生長IgG3-(3,4-二氧苯) 98%
IAA/FITC 熒光標(biāo)記-3-/植物生長單克隆IgG地布
IASPP/FITC 熒光標(biāo)IASPP蛋白IgG地布
Iba-1/FITC 熒光標(biāo)記離子鈣接頭蛋白IgG2-羥丁鈉 97%
ICAD/FITC 熒光標(biāo)記Caspase 激活的脫氧核糖核抑制劑IgG3--3-氧雜環(huán)丁烷 97%
ICAM-1(CD54)/FITC 熒光標(biāo)記間粘附分子-1IgG鄰苯二酰肼 99%
CD54/ICAM-1/Biotin 生物標(biāo)記間粘附分子-1IgG1-苯哌 97%
ICAM-3/CD50/FITC 熒光標(biāo)記間粘附分子-3IgG2-吡啶 99%