產(chǎn)品分類:酶抑制劑
儲存條件:—20℃,避光,12個月
用途:蛋白酶抑制劑
注意事項:主要由亮抑蛋白酶肽,、胰凝乳蛋白酶抑制劑和抑胃肽酶組成,。稀釋100倍后使用。工作濃度為5-10umol/L,。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠,、效果穩(wěn)定、靈敏度高,、操作簡單,、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購,!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
CLP蛋白酶抑制劑混合液 | 1ml | FS-R7512 |
配制與標(biāo)定的實驗原理:
1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,,是一種白色晶體粉末,,常用H4Y表示,,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。
2,、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,,然后用水洗凈,,烘干。
配制步驟:
1,、取適量鋅片放在100mL燒杯中,,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水,、純水洗凈,,烘干、冷卻,。
2,、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿,。
3,、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁,,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,,搖勻,。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,,作為對照品溶液,。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃,;進(jìn)樣口溫度250℃,;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,,分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,,一份置冷處保存,,一份置室溫中保存,在第1,、3,、7,、10、15天重新配制一份對照品溶液,,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液,。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量,。記錄下來,,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠,。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,,推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,,來確定最佳篩選濃度,。
一般而言,哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL,;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL,;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度,。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,,CO2培養(yǎng)過夜,;注:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量,。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例,,可設(shè)定50,,100,250,,500,,750,1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液,。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,。每個濃度做三個平行孔,。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度,。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度,。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代),。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷,。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會降低,。為了得到較好的篩選效果,,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細(xì)胞類型,,轉(zhuǎn)染,,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
球孢白僵菌堿性蛋白1樣蛋白抗體Anti-CYP11A1 Antibody正五聚蛋白3(PTX3)
燼灰土類芽孢桿菌E3泛蛋白連接144A抗體Anti-CYP11B1 Antibody正輔因子4(PC4)
樹舌靈芝(平蓋靈芝)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子RFX4抗體Anti-CYP11B1/C11B2/CYP11B2 Antibody整合連鎖激(ILK)
枯草芽孢桿菌Rab溶體相互作用蛋白樣2抗體Anti-CYP19A1 Antibody整合關(guān)聯(lián)蛋白(IAP)
大腸埃希氏菌12號染色體開放閱讀框52抗體Anti-CYP17A1 Antibody整合β8(ITGβ8)
Maritalea myrionectae梅克爾憩室綜合征相關(guān)蛋白5抗體Anti-CYP19A1 Antibody整合β7(ITGβ7)
杰丁畢赤酵母β1,3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移抗體Anti-CYP17A1 Antibody整合β6(ITGβ6)
白囊耙齒菌RAB3-GTP激活蛋白催化亞單位1抗體Anti-CYP19A1 Antibody整合β5(ITGβ5)
灰略紅鏈霉菌RAB3-GTP激活蛋白催化亞單位2抗體Anti-CYP1A1 Antibody整合β4(ITGβ4)
鮑氏桑黃維甲誘導(dǎo)蛋白1抗體Anti-CYP19A1 Antibody整合β3(ITGβ3)
長野本森頓酵母環(huán)指蛋白13抗體Anti-CYP1A1 Antibody整合β2(ITGβ2)
米曲霉環(huán)指蛋白15抗體Anti-CYP1A2 Antibody整合β1(ITGβ1)
蠟狀芽孢桿菌金屬蛋白抑制因子RECK抗體Anti-CYP1A1 Antibody(PB0573)整合αV(ITGαV)
羅爾細(xì)薄菌視黃受體應(yīng)答蛋白3抗體Anti-CYP1B1 Antibody(PB0575)整合αM(ITGαM)
Phoma medicaginis var. medicaginis視黃受體應(yīng)答蛋白1抗體Anti-CYP21A1 Antibody整合αD(ITGαD)
雙孢畢赤酵母環(huán)指蛋白128抗體Anti-CYP24A1 Antibody整合α9(ITGα9)
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.98
鏈格孢Alternaria│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.99
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
CLP蛋白酶抑制劑混合液phospho-AR ( p-Ser580)/FITC 熒光su標(biāo)記磷suan化雄激su受體IgG規(guī)格: 0.2ml
AR(phospho Ser213/Ser791)/FITC 熒光su標(biāo)記磷suan化雄激su受體IgG規(guī)格: 0.2ml
AR Alpha1/FITC 熒光su標(biāo)記α1腎上腺su能受體IgG規(guī)格: 0.2ml
ARC/FITC 熒光su標(biāo)記ARCIgG規(guī)格: 0.2ml
ARF6/FITC 熒光su標(biāo)記ADP核糖基化因子6IgG規(guī)格: 0.2ml