詳細介紹
產(chǎn)品分類:免疫組化
儲存條件:—20℃,12個月
用途:抗原修復緩沖液
注意事項:主要由胃蛋白酶溶解于稀酸溶液中,。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定,、靈敏度高,、操作簡單,、易保存等特點,,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
胃蛋白酶抗原修復液 | 100ml | FS-R7272 |
配制與標定的實驗原理:
1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因,;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,,常用H4Y表示,,溶解度很小,,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2,、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,,基準試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,,烘干,。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,,再用自來水、純水洗凈,,烘干,、冷卻。
2,、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,,蓋好小表面皿。
3,、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,,用純水稀釋至標線,搖勻,。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液,。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱,;柱溫120℃;進樣口溫度250℃,;檢測器溫度250℃,;分流進樣,分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000,。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,,一份置室溫中保存,,在第1、3,、7,、10,、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液,。照氣相色譜法,,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,,培養(yǎng)基,,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),,即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度,。
一般而言,,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL,;真菌300-1000μg/mL,。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,,37℃,,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,,可增加接種量,。
2) 根據(jù)細胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動物細胞為例,,可設(shè)定50,100,,250,,500,750,,1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液,。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔,。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基,。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度,。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷,。則當細胞過于稠密,,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,,以及篩選效果,。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。
殼菌同源盒基因HOXA3蛋白抗體Human STK32B ELISA Kit大鼠肝X受體β(LXRβ)免疫試劑盒
谷棒桿菌同源盒基因HOXA4蛋白抗體Human STK33 ELISA Kit大鼠肝X受體α(LXRα)免疫試劑盒
活潑微球菌同源盒基因HOXA6蛋白抗體Human STK33 ELISA Kit大鼠甘油三酯(TG)免疫試劑盒
翹鱗香菇同源盒基因HOXA7蛋白抗體Human STK32B ELISA Kit大鼠甘油-3-磷脫氫(GAPDH)免疫試劑盒
鏈格孢羥基類固(17β)脫氫4/17β-HSD4抗體Human STK32C ELISA Kit大鼠甘露糖寡糖1,2-α-甘露糖苷IA(MAN1A1)免疫試劑盒
白腐菌血紅蛋白ζ鏈/Hemoglobin ζ 抗體Human STEAP3 ELISA Kit大鼠甘膽(CG)免疫試劑盒
粘絲膜菌血紅結(jié)合蛋白1抗體Human STK36 ELISA Kit大鼠/甘(GAL)免疫試劑盒
霍氏格里蒙特氏菌血紅蛋白α抗體Human STIM1 ELISA Kit大鼠甘免疫試劑盒
澳型核果褐腐病菌結(jié)合球蛋白β抗體Human STIM2 ELISA Kit大鼠干因子受體(SCFR)免疫試劑盒
好食脈孢菌海馬豐富基因轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體Human STARD3NL ELISA Kit大鼠干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)免疫試劑盒
動物雙歧桿菌組蛋白H2AZ抗體Human STEAP4(STEAP family member 4) ELISA Kit大鼠干擾誘導蛋白11(IP-11/CXCL11)免疫試劑盒
巴氏醋桿菌羅旺亞種熱休克因子2結(jié)合蛋白抗體Human STARD5 ELISA Kit大鼠干擾誘導蛋白10(IP-10/CXCL10)免疫試劑盒
光帽磷傘HEATR2蛋白抗體Human STIP1 ELISA Kit大鼠鈣衛(wèi)蛋白(CALP)免疫試劑盒
芽胞桿菌鐵硫簇整合同源物2蛋白抗體Human STEAP3 ELISA Kit大鼠鈣網(wǎng)蛋白(CRT)免疫試劑盒
尖鐮孢黃瓜專化型(黃瓜枯萎病菌)麻疹病血凝抗體Human STEAP2 ELISA Kit大鼠鈣腔蛋白(CALU)免疫試劑盒
多布克魯維酵母同源盒蛋白HOXC5抗體Human STIM1 ELISA Kit大鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)免疫試劑盒
: Blackburn資源名稱: 鏈球菌 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC ,>98.5%(GC)沒食子兒茶
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC, ≥99.5% (GC)芒柄花苷
假交替單胞菌Pseudoalteromonas│tetraodonis 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,>99.5%(GC)豆甾
胃蛋白酶抗原修復液SP ELISA Kit 大鼠P物質(zhì)規(guī)格: 48T
AFU ELISA Kit 大鼠αL巖藻糖mei規(guī)格: 48T
TPO ELISA Kit 大鼠jia狀腺過氧化物mei規(guī)格: 48T
PI ELISA Kit 大鼠胰島su規(guī)格: 48T
大鼠抗IgE受體ELISA Kit 大鼠抗IgE受體規(guī)格: 48T