詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體,。
3,、進行動物免疫實驗。
4,、試取血樣進行測試,查看免疫效果,。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,,采集全部血清,。
6,、純化出抗體,。
7,、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業(yè)供應的抗體,,抗體是用于化學反應,、分析化驗,、研究實驗、教學實驗,、化學配方使用的純凈化學品,,產(chǎn)品品質,價格實惠,,多種規(guī)格供應,,售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 透明質酸介導細胞游走受體抗體 |
英文名稱 | CD168 |
規(guī)格 | 0.1ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA,、HAS等,。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔,、雞,、大小鼠等,大量時需要用到狗,、綿羊,、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔,、綿羊,、山羊可采用靜動脈采血,家兔,、豚鼠,、大鼠、雞可采用心臟采血,,家兔,、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,,具有高效,特異性強,,純度高的特定,。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量,、純度以及特異性,。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久,。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑,。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,,純化鑒定后可直接作為免疫原,;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA,、HAS等,。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔,、雞,、大小鼠等,大量時需要用到狗,、綿羊,、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔,、綿羊,、山羊可采用靜動脈采血,家兔,、豚鼠,、大鼠、雞可采用心臟采血,,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血,。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,,特異性強,,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量,、相對分子的質量,、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑,。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應,。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中,。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應,。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5,;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液,;100g/L三醋酸;70%乙醇,;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5),;胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱,;¥-記數(shù)器,;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行,;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml,;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年,;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低,;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見,。
Agouti相關蛋白(AGRP)釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
膜輔蛋白(MCP/CD46) 黃綠木霉拉丁屬名: Trichoderma aureoviride
延伸蛋白A(EloA)蘇云金芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus thuringiensis
酰化刺激蛋白(ASP) 蝙蝠蛾擬青霉拉丁屬名: Paecilomyces hepiali
殺菌性/通透性增加蛋白(BPI) 5#---3號(梨形灰包)注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,,非藥用,,非食用
細胞外基質酸糖蛋白(MEPE) 黑根霉注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,,非藥用,,非食用
復制蛋白A(RPA-70) 解糖假蒼白桿菌拉丁屬名: Pseudochrobactrum saccharolyticum
軟骨寡聚基質蛋白(COMP) 許旺酵母拉丁屬名: Schwanniomyces occidentalis
抗原提呈相關轉運蛋白/T細胞活化蛋白(TAP)白僵菌拉丁屬名: Beauveria sp.
免疫抑制酸性蛋白(IAP)西蕃蓮莖基腐病注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,,非藥用,,非食用
麥角蛋白IgA(Gliadin-IgA)赭曲霉拉丁屬名: Aspergillus ochraceus
發(fā)動蛋白2(DNM2)金黃色葡萄球菌拉丁屬名: aureus
著絲粒蛋白B(CENP-B)枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
巨噬細胞刺激蛋白(MSP)枯草芽胞桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 瓜果腐霉拉丁屬名: Pythium aphanidermatum
核基質蛋白22(NMP-22)香菇注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,,非藥用,,非食用
透明質酸介導細胞游走受體抗體卵巢、胎盤,、前列腺,、蛋白22抗體Lauroscholtzine中文名:N-甲基樟蒼堿別名:N-Methyllaurotetanine分子式:C20H234
三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白7抗體Cassythicine中文名:凱薩斯新堿別名:分子式:C19H194
Na+/K+-ATPase α1 鈉鉀ATP酶α1抗體Boldine中文名:波爾定堿別名:分子式:C19H214
磷酸化鈉鉀ATP酶α1多肽抗體Evoxine中文名:別名:分子式:C18H216
肌動蛋白樣蛋白6B抗體14,15-Didehydroisoeburnamine中文名:別名:14,15-Didehydroisovincal分子式:C19H22N2O