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產(chǎn)品分類：抗生素

儲存條件  —20℃,12個月

用途  細(xì)胞培養(yǎng)抗生素

注意事項(xiàng)  無菌溶液,。主要由青霉素,、鏈霉素等組成,經(jīng)過濾除菌。

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠,、效果穩(wěn)定,、靈敏度高、操作簡單,、易保存等特點(diǎn),，咨詢并訂購！

 

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因,；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末,，常用H4Y表示,，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。

2,、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,，然后用水洗凈,，烘干。

配制步驟：

1,、取適量鋅片放在100mL燒杯中,，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水,、純水洗凈,，烘干、冷卻,。

2,、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿,。

3,、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁,，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線,，搖勻,。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,，作為對照品溶液,。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃,；進(jìn)樣口溫度250℃,；檢測器溫度250℃；分流進(jìn)樣,，分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對照品溶液,，一份置冷處保存,，一份置室溫中保存，在第1,、3,、7、10,、15天重新配制一份對照品溶液,，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,，并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量,。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,，驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠,。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基,，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve）,，即劑量反應(yīng)性曲線,，來確定最佳篩選濃度。

一般而言,，哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL,；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL,。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個濃度,。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,，37℃，CO2培養(yǎng)過夜,；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型,，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定50,，100,，250，500,，750,，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液,。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,。每個濃度做三個平行孔,。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度,。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度,。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）,。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷,。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低,。為了得到較好的篩選效果,，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細(xì)胞類型,，轉(zhuǎn)染,，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。

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青霉素-鏈霉素混合溶液CD68/FITC  熒光標(biāo)記CD68IgGDL-賴氨 99%

CD69/CLEC2C/AIM/FITC  熒光標(biāo)記活化誘導(dǎo)分子CD69IgGDL-色氨 99%

CD73/FITC  熒光標(biāo)記胞漿-5′-核-ⅡIgG3- 98%

CD79A/IGBP-1 /FITC  熒光標(biāo)記免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1IgG二酰 97%

B7-1/CD80 /FITC  熒光標(biāo)記抗激分子B7-1蛋白IgG3-氨吡啶 99%

CD80/B7-1/FITC  熒光標(biāo)記激分子B7-1蛋白IgG3-氨吡啶

CD82/KAI1/FITC  熒光標(biāo)記腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1IgG4-氨-2-吡啶 98%

CD83/Cell surface protein HB15/FITC  熒光標(biāo)記CD83IgG4-氨吡啶 98%（劇品）