產(chǎn)品分類(lèi):抗生素
儲(chǔ)存條件 4℃,避光,12個(gè)月
用途 強(qiáng)烈抑制哺乳動(dòng)物和原核的RNA聚合酶,能抑制細(xì)菌DNA轉(zhuǎn)錄合成RNA,可用于抗結(jié)核桿菌
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠,、效果穩(wěn)定,、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單,、易保存等特點(diǎn),,咨詢并訂購(gòu)!
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
利福平溶液 | 10ml | FS-R6326 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因,;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,,常用H4Y表示,,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。
2,、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,,然后用水洗凈,,烘干,。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,,再用自來(lái)水、純水洗凈,,烘干、冷卻,。
2,、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿,。
3,、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁,,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,,搖勻,。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,,作為對(duì)照品溶液,。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃,;進(jìn)樣口溫度250℃,;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,,分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,,一份置冷處保存,,一份置室溫中保存,在第1,、3,、7、10,、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量,。記錄下來(lái),,保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠,。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,,推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,,來(lái)確定最佳篩選濃度,。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL,;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL,;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度,。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜,;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,,100,,250,500,,750,,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔,。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度,。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷,。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆(集落)的形成情況,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,,這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型,轉(zhuǎn)染,,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
粘蛋白/粘液1(MUC1)MUC1 ELISA Kit血管生成相關(guān)蛋白6抗體包裝1g
再生基因蛋白1a(REG-1a)REG-1a ELISA KitMuellerian繆勒管激抑制因子抗體包裝5g
載脂蛋白H(Apo-H)Apo-H ELISA Kit酪蛋白激受體A8抗體包裝1g
載脂蛋白E(Apo-E)Apo-E ELISA Kit脂肪酰家族成員1抗體包裝5g
載脂蛋白B48(apo-B48)apo-B48 ELISA Kit芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣2抗體包裝100mg
載脂蛋白B100(apo-B100)apo-B100 ELISA Kit磷化芳香N-乙?;D(zhuǎn)移抗體包裝1g
載脂蛋白B100(Apo B100)Apo B100 ELISA Kit肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白1抗體包裝500mg
載脂蛋白B(ApoB)ApoB ELISA Kit粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體包裝5g
載脂蛋白A5(apo-A5)apo-A5 ELISA Kit肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白DOC6抗體包裝100mg
載脂蛋白A1(apo-A1)apo-A1 ELISA KitAFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白28抗體包裝500mg
載脂蛋白A1(Apo A1)Apo A1 ELISA Kit激活受體相互作用蛋白1抗體包裝1g
孕受體(PROGR)PROGR ELISA Kit固類(lèi)還原家族7成員A2抗體包裝5g
孕(PROG)PROG ELISA Kit蛋白激AKT1,2,3抗體包裝25g
孕激/孕(PROG)PROG ELISA Kit帕金森病相關(guān)蛋白ATP13A2抗體包裝5g
誘導(dǎo)型一氧化合成(iNOS)iNOS ELISA Kit肌側(cè)索硬化蛋白2抗體包裝100g
繆勒激2型受體抗體Ⅱ型膠原(COL2)AT-406 是一種有效的,,可口服的 Smac 模擬物,為 IAPs 的拮抗劑,,能夠抑制 XIAP,,cIAP1 和 cIAP2 蛋白,Ki 值分別為 66.4,,
利福平溶液CD18/LFA-1/FITC 熒光標(biāo)記白粘附蛋白IgG四對(duì)苯二 98%
CD19/FITC 熒光標(biāo)記CD19IgG硫鈰,四水 AR,,98%
Phospho-CD19 (Tyr531) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大,、小鼠化CD19IgG硝鈰,,六水 99.5% metals basis
CD19/PE 熒光PE標(biāo)記CD19IgG醋鈰 99.99% metals basis
CD20/FITC 熒光標(biāo)記CD20IgG硫鈰,四水 99.9% metals basis
CD20/Biotin 生物化CD20IgG硝釓,六水 AR,99%
CD20/MS4A1/PE 熒光PE標(biāo)記CD20IgG硝釹,六水 AR,,99.0 %
CD25/IL-2RA /PE-Cy5 熒光PE-Cy5標(biāo)記兔抗人,、大、小鼠白介2受體a鏈IgG醋釹 99.9% metals basis