試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存,;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存,;試劑一:液體10 mL×1瓶,,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,,4℃保存,;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,,用時加入3mL蒸餾水,,混勻,用不完的試劑4℃保存一周,;試劑四:粉劑×1瓶,,4 ℃保存,用時加入3mL蒸餾水,,混勻,,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,,4 ℃保存,;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存,;試劑七:液體50mL×1瓶,,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計,、臺式離心機,、移液器,、1 ml玻璃比色皿、研缽,、冰和蒸餾水,。
商品介紹:
測定意義 脂蛋白酯酶是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞,、骨骼肌細(xì)胞,、乳腺細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等實質(zhì)細(xì)胞合成的一種酶,可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯,,以供組織氧化供能和貯存,,并在不同的組織表現(xiàn)出不同的生理意義。 測定原理 脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基苯酚,,在400nm有特征吸收峰,。 自備實驗用品及儀器 天平、冷凍離心機,、研缽,、水浴鍋、可見分光光度計,、1 mL玻璃比色皿,。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提取:
1,、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),,95℃水浴5min(蓋緊,,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,取上清,,置冰上待測,。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),,加入1ml堿性提取液),,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,取上清,,置冰上待測,。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),,冰浴研磨,,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),;冰浴 中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,,加入500μl堿性提取液使之中和,,混勻,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,置冰上待測,。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),,冰浴研磨,,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失),;冰浴 中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,,加入500μl酸性提取液使之中和,, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,,置冰上待測。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液),, 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,,超聲3s,,間隔10s,重復(fù)30次),,95℃水浴5min (蓋緊,,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min,;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,,混勻,,10000g 4 ℃離心10min,取上清,,置冰上待測,。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),,棄上清,,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,,功率20%或200W,,超聲3s,間隔10s,,重復(fù)30次),,95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失),;冰浴中冷卻后,,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,,加 入500μl酸性提取液使之中和,,混勻,10000g 4 ℃離心10min,,取上清,,置冰上待測,。 |
ADH測定操作:
1. 分光光度計預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,,蒸餾水調(diào)零,。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水,、800μL試劑二和100μL試劑四,,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,,分別記為A1和A2,。△A空白管=A1-A2,。,。
4. 測定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A3和A4,?!鰽測定管=A3-A4。
注意:空白管只需測定一次,。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。
③按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì),。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存,。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。
小白菊內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Carbocistein;S-Carboxymethyl-L-cysteine乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白包裝100g
小駁骨(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: S-Benzyl-L-cysteine組蛋白H2B.s抗體包裝25g
小檗紅堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Glutamic acid hydrochloride組蛋白去乙?;?+5+9抗體包裝5g
小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nω-Nitro-L-arginine熱休克蛋白27相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
小檗皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nalpha-Benzoyl-L-arginine卟膽原脫抗體包裝5g
小豆蔻明(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Asparagine Anhydrous異質(zhì)核糖核蛋白U2樣蛋白抗體包裝25g
小茴香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Asparagine anhydrous肝癌衍生生長因子2抗體包裝5g
小薊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: N'-Trityl-L-asparagine肝癌相關(guān)抗原57抗體包裝1g
小秦艽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Aspartic Acid 1-Benzyl Ester補體C3抗體包裝5g
小葉榕(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Aspartic acid 1-methyl ester型流感病血凝抗體包裝25ml
纈草三酯英文名: L-Aspartic acid β-methyl ester hydrochloride狀旁腺功能亢進(jìn)蛋白2/分裂周期73抗體包裝5ml
薤白(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: S-Methyl-L-cysteine線粒體絲蛋白抗體包裝100g
辛弗林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: S-Trityl-L-cysteine/鈉超化激活環(huán)核苷門控通道蛋白2抗體包裝25g
辛弗林鹽鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Glutamic Acid 1-Methyl Ester熱休克蛋白β7抗體包裝5g
辛辣內(nèi)酯A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Glutamic acid diethyl ester hydrochloride/鈉超化激活環(huán)核苷門控通道蛋白3抗體包裝1ml
平常假絲酵母Candida│inconspicus 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品用于含量測定梅螺旋體試劑盒;Triptolide
大麗花輪枝孢(棉花黃萎病菌)Verticillium│dahliae 質(zhì)量規(guī)格:≥98.5%,BR,二合物梅螺旋體試劑盒紅;Celastrol
長裙竹蓀Dictyophora│indusiata 質(zhì)量規(guī)格:純度>99%,BR,可用于培養(yǎng)錨蛋白B試劑盒落新婦苷;Astilbin
脂蛋白酯酶(LPL)測試盒50管/24樣麥根腐平臍蠕孢 二甲基二酸二甲酯生物Elisa
希瓦氏屬 3,5-二溴甲酯轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1Elisa
青春雙歧桿 2-硝基-9,9-二甲基芴絲蟲抗體IGgElisa
烏芝 1,6-己成纖維生長因子18Elisa
茄鏈格孢 奧沙秦鈉表面原性蛋白Elisa
哈里法克斯希瓦氏 2,3-吡啶二甲酸二甲酯正五聚蛋白2Elisa
剛果嗜皮 1,1'-聯(lián)萘羧肽B2Elisa
赭色擲孢酵母 2,3-二氨基血纖蛋白原γ鏈Elisa
黃蜜環(huán) 2,6-萘二磺酸鈉3-羥-3-甲戊二酸單酰還原Elisa
馬葡萄球 2,3-二甲酸去乙酰化Sirtuin-4Elisa
農(nóng)藥速測 5--2-苯基-3H-咪唑-4-甲去乙?;疭irtuin-3Elisa
大腸埃希氏桿 3--4-甲氧羰基苯基酸紅富鐵Elisa
大腸埃希氏 4-乙酰吡啶6磷酸果糖2激,;果糖-2,6-二磷酸3Elisa
桿狀毛霉 五氟磷酸化MEK激Elisa
雜色曲霉 L-蘇P-CREBElisa