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詳細介紹
產品分類：微生物染色
儲存條件：室溫,避光,12個月
用途：V.P試劑有效成分為萘酚,，適用于腸桿菌科細菌、非發(fā)酵菌,、寄養(yǎng)性細菌,、厭氧菌的鑒定。
注意事項：是在某些微生物能將葡萄糖分解為丙酮酸,，丙酮酸縮合,、脫酸轉變?yōu)橐阴＜谆状迹趶娝嵯潞笳吲c氧產生二乙酰,，二乙酰與蛋白質中的含胍基成分作用生成紅色化合物,，即為V.P實驗陽性
公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩(wěn)定,、靈敏度高,、操作簡單、易保存等特點,，咨詢并訂購,！
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
伏-普試驗試劑 | 2×10ml | FS-R7043 |
配制與標定的實驗原理：
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因,；
EDTA是四元酸,，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示,，溶解度很小,，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2,、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈,，烘干,。
配制步驟：
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min,，再用自來水、純水洗凈,，烘干,、冷卻,。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn,，蓋好小表面皿,。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,，待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中,，用純水稀釋至標線,，搖勻。
實驗方法與判定：
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量,，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,，作為對照品溶液。
3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱,；柱溫120℃,；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃,；分流進樣,，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000,。
4.實驗方法：配制的對照品溶液,，一份置冷處保存，一份置室溫中保存,，在第1,、3、7,、10,、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液,。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量,。記錄下來,，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩(wěn)定可靠,。
使用方法：
1. 常用篩選濃度
注意：用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據細胞類型,，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化,，推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve）,，即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度,。
一般而言,，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL,；真菌300-1000μg/mL,。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現(xiàn),，至少選擇5個濃度。
1） 第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,，37℃,，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞,，可增加接種量,。
2） 根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度,。以哺乳動物細胞為例,，可設定50，100,，250,，500，750,，1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液,。
3） 第二天：替換舊的培養(yǎng)基,，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔,。
4） 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基,。
5） 按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度,。
3. 穩(wěn)定轉染細胞的篩選
1） 轉染48h后,，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷,。則當細胞過于稠密,，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。
3） 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,，這取決于宿主細胞類型,，轉染，以及篩選效果,。
4） 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。
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