堿性磷酸酶染色液公司正在銷售的產(chǎn)品：豚鼠激活素A(ACVA)試劑盒Anti-PPARA Antibody磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗體
豚鼠靶向核糖核酸酶(TR)試劑盒Anti-PPARG Antibody絲棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1抗體
豚鼠神經(jīng)降壓素(NT)試劑盒 Anti-PPARG Antibody脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5抗體
豚鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF) 試劑盒Anti-PPARGC1A Anti

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠,、效果穩(wěn)定、靈敏度高,、操作簡(jiǎn)單,、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu),！

產(chǎn)品分類：酶類染色

儲(chǔ)存條件：4℃,避光,6個(gè)月

用途：ALP染色液,，堿性磷酸酶染色,適用于石蠟切片

注意事項(xiàng)：屬于金屬沉淀法,堿性磷酸酶活性出呈棕黑色,可能出現(xiàn)假陽(yáng)性,采用陰性對(duì)照。二甲苯應(yīng)采用AR以上級(jí)別,。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸,，是一種白色晶體粉末,，常用H4Y表示，溶解度很小,，室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,，然后用水洗凈，烘干,。

配制步驟：

1,、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min,，再用自來(lái)水,、純水洗凈,，烘干、冷卻,。

2,、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿,。

3,、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁,，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線,，搖勻,。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,，作為對(duì)照品溶液,。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃,；進(jìn)樣口溫度250℃,；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣,，分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液,，一份置冷處保存,，一份置室溫中保存，在第1,、3,、7、10,、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量,。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠,。

白土苓(短柱肖菝契)（標(biāo)準(zhǔn)品） DL-Mandelic acid磷化KB抑制蛋白激α/β抗體包裝1g

白土苓(華南肖菝葜)（標(biāo)準(zhǔn)品） Ascorbic acid；vitamin C磷化KB抑制蛋白激α/β抗體包裝5g

白薇（標(biāo)準(zhǔn)品） Ascorbic acid；vitamin C纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白46抗體包裝100g

白鮮堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Octadecanamine白介-10受體a抗體包裝25g

白鮮皮（標(biāo)準(zhǔn)品） Sorbic acid白介-13受體a1抗體包裝500g

白楊(標(biāo)準(zhǔn)品） Luliconazole免疫相關(guān)鳥苷三磷基因抗體包裝1g

白楊-7-O-龍膽二糖苷 5-Nitro-1,10-phenanthroline白介-13受體a2抗體包裝25g

白英（標(biāo)準(zhǔn)品） Rotundic acid嗜粒趨化蛋白CCL1抗體包裝5g

白芷（標(biāo)準(zhǔn)品） Bromophenol blue sodium salt磷化胰島樣生長(zhǎng)因子1受體抗體包裝1g

百部(對(duì)葉百部)（標(biāo)準(zhǔn)品） Thymol blue sodium salt胰島降解抗體包裝5g

百部（直立百部）（標(biāo)準(zhǔn)品） Sodium tetraphenylboron白介12抗體包裝100ml

百合（標(biāo)準(zhǔn)品） Sodium sulfosalicylate白介4抗體包裝25g

百兩金A（標(biāo)準(zhǔn)品） Nitroso R Salt胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白9抗體包裝5g

百秋李(標(biāo)準(zhǔn)品) Rhodizonic acid sodium salt干擾-gamma受體2抗體包裝10mg

百蕊草（標(biāo)準(zhǔn)品） Indigo carmine白介27受體抗體包裝100mg

弧菌Vibrio│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR,無(wú)物類白抗原E試劑盒;2,6-Dihydroxypur

蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,二合物類白抗原B27試劑盒湖貝;Hupehenine

扁桃擬莖點(diǎn)霉Phomopsis│amygdaliana Canonaco 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,無(wú),EP雷帕霉靶蛋白試劑盒黑芥子硫苷一;Sinigrin m
堿性磷酸酶染色液PIWIL1(piwi-like 1)  piwi 樣1蛋白(抗原)規(guī)格： 0.5mg

PPAR Gamma (peroxisome proliferator-activated receptor-gamma)  過(guò)氧化mei活化增生受體γ（抗原）規(guī)格： 0.5mg

PP2Ac  蛋白磷suanmei4(抗原)規(guī)格： 0.5mg

Runx3  一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因(抗原)規(guī)格： 0.5mg

RRAD (Ras-related associated with diabetes )  RRAD(多肽抗原)規(guī)格： 0.5mg

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,，培養(yǎng)基,，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL,。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve）,，即劑量反應(yīng)性曲線,，來(lái)確定最佳篩選濃度,。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL,；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL,；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度,。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜,；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型,，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度,。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50,，100,，250，500,，750,，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液,。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔,。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度,。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度,。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷,。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液,。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染,，以及篩選效果,。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可,。