詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原,;小分子蛋白或化合物等分子量小,,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA,、OVA,、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠,、家兔,、雞、大小鼠等,,大量時需要用到狗,、綿羊、山羊等,。
3. 免疫血清的收集:一般家兔,、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,,家兔,、豚鼠、大鼠,、雞可采用心臟采血,,家兔、山羊,、綿羊可采用靜脈采血,。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,,具有高效,特異性強,,純度高的特定,。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量,、純度以及特異性,。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,,而真空干燥保存時間可以更久,。保存前需經除菌并添加防腐劑。
產品名稱 | 自噬相關蛋白7抗體 |
英文名稱 | APG7 |
規(guī)格 | 0.1ml |
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公司專業(yè)供應的抗體,,抗體是用于化學反應,、分析化驗,、研究實驗、教學實驗,、化學配方使用的純凈化學品,,產品品質,價格實惠,,多種規(guī)格供應,,售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原,。
小分子蛋白或化合物等分子量小,,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA,、OVA,、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠,、家兔,、雞、大小鼠等,,大量時需要用到狗,、綿羊、山羊等,。
3. 免疫血清的收集
一般家兔,、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,,家兔,、豚鼠、大鼠,、雞可采用心臟采血,,家兔、山羊,、綿羊可采用靜脈采血,。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,,具有高效,,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量,、相對分子的質量,、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存,??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,,而真空干燥保存時間可以更久,。保存前需經除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術:
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應,。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化,。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應,。
(二)準備
1.試劑
經親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體,;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液,;100g/L三醋酸,;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5),;胺T反應終止緩沖液,;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器,;玻璃纖維濾,。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質,,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年,;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天),;
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見,。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2,、選擇實驗活體,。
3,、進行動物免疫實驗。
4,、試取血樣進行測試,,查看免疫效果。
5,、如果免疫成功,,殺死實驗活體,,采集全部血清。
6,、純化出抗體,。
7、鑒定抗體,。胎牛血清(無菌采制)
HAT添加劑(50×)聚生殼菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,,非食用
MEM維生素溶液(100×)漢遜德巴利酵母 拉丁屬名: Debaryomyces hansenii
重組胰島素溶液(10mg/ml)粉紅單端孢霉注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,,非食用
HT添加劑(50×)乳酸乳球菌拉丁屬名: Lactococcus lactis
β-巰基乙醇(55mM),,1000×原玻璃蠅節(jié)桿菌拉丁屬名: Arthrobacter protophormiae
重組胰島素溶液(10mg/ml)噬尼古丁節(jié)桿菌拉丁屬名: Arthrobacter nicotinovorans
L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液(200mM),100×嗜熱鏈球菌拉丁屬名: Streptococcus thermophilus
丙酮酸鈉溶液(100mM),,100×Ramlibacter tataouinensis 拉丁屬名: Ramlibacter tataouinensis
潮霉素B溶液(50mg/mL)產氮假單胞菌(可定)拉丁屬名: Pseudomonas azotoformans
硫酸卡那霉素溶液(100×)莫哈韋芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus mojavensis
MEM非必需氨基酸溶液(NEAA),,100×變綠肉座菌拉丁屬名: Hypocrea virens
L-谷氨酰胺溶液(200mM),100×少孢酵母拉丁屬名: Saccharomyces exiguus
D-葡萄糖溶液(200g/L)盤多毛孢菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,,非藥用,非食用
通用血清型程序凍存液短刺小克銀漢霉拉丁屬名: Cunninghamella blakesleana
通用血清型程序凍存液釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
兩性霉素B溶液(250μg/mL)雞傷寒沙門氏菌拉丁屬名: gallinarum
自噬相關蛋白7抗體2號染色體開放閱讀框57抗體Marilactone中文名:別名:分子式:C8H10O3
2號染色體開放閱讀框29抗體4'-O-Demethylbroussonin A中文名:別名:1-(2,4-Dihydroxyphenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)propane分子式:C15H16O3
3號染色體開放閱讀框21抗體2'-O-Methylbroussonin A中文名:別名:分子式:C17H20O3
CD83抗體3,4',5-Trimethoxystilbene中文名:白藜蘆醇*醚別名:Resveratrol trimethyl ether分子式:C17H18O3
17號染色體開放閱讀框59抗體Pogostone中文名:廣藿香酮別名:Dhelwangin分子式:C12H16O4