詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體,。
3,、進行動物免疫實驗。
4,、試取血樣進行測試,,查看免疫效果。
5,、如果免疫成功,,殺死實驗活體,采集全部血清,。
6,、純化出抗體。
7,、鑒定抗體,。胎牛血清(無菌采制)
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學反應(yīng),、分析化驗,、研究實驗,、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,,產(chǎn)品品質(zhì),,價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),,售后完善,。
產(chǎn)品名稱 | 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體 |
英文名稱 | phospho-ATG4D(Ser341) |
規(guī)格 | 0.1ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,,純化鑒定后可直接作為免疫原,。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見偶聯(lián)載體如BSA,、OVA、HAS等,。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠,、家兔、雞,、大小鼠等,大量時需要用到狗,、綿羊,、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔,、綿羊,、山羊可采用靜動脈采血,家兔,、豚鼠,、大鼠、雞可采用心臟采血,,家兔,、山羊、綿羊可采用靜脈采血,。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,,特異性強,,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量,、相對分子的質(zhì)量,、純度以及特異性,。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久,。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑,。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,,純化鑒定后可直接作為免疫原,;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見偶聯(lián)載體如BSA,、OVA、HAS等,。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠,、家兔、雞,、大小鼠等,,大量時需要用到狗、綿羊,、山羊等,。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊,、山羊可采用靜動脈采血,,家兔、豚鼠,、大鼠,、雞可采用心臟采血,家兔,、山羊,、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,,具有高效,特異性強,,純度高的特定,。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性,。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久,。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑,。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應(yīng)用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化,。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中,。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體,;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5,;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸,;70%乙醇,;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液,;
2.儀器
凝膠過濾柱,;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾,。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行,;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml,;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天),;
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見,。
唑螨(標準品) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:分析標準品,99.5%純度:≥98%
精乙基噁唑禾草靈(標準品) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:分析標準品,97%純度:≥98%
Amberlite® IRC748螯合型離子交換樹脂 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:純度:≥97%
Amberlyst15離子交換樹脂(濕) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:濕純度:≥98%
Amberlyst 15離子交換樹脂(干) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:干純度:≥98%
Amberlite® IRA900 陰離子交換樹脂 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:純度:≥98%
Amberlite® XAD16非離子型大孔樹脂(2060 mesh) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:2060 mesh純度:≥99%
殺螟丹(標準品) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:分析標準品,99%純度:≥90%
殺螟丹標準溶液(100μg/ml,u=3%) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:100μg/ml,u=3%純度:≥90%
殺螟丹標準溶液(10μg/ml,u=3%) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10μg/ml,u=3%純度:≥98%
莎稗(標準品) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:分析標準品,98.5%純度:≥98%
Amberlite® IRA410 離子交換樹脂(719(202)是高等級凝膠強堿Ⅱ型陰離子交換樹脂) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:719(202)是高等級凝膠強堿Ⅱ型陰離子交換樹脂純度:≥98%
二銨(分析標準品,用于凱氏定法測定,≥99.5%) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:分析標準品,用于凱氏定法測定,≥99.5%純度:≥98%
二銨(for HPLC,≥99.0%(T)) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:for HPLC,≥99.0%(T)純度:≥95%
Amberlite XAD7HP 離子交換樹脂(Mesh 2060) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:Mesh 2060純度:≥96%
Amberlite XAD4 非離子型大孔樹脂(粒徑0.49 0.69 mm) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:粒徑0.49 0.69 mm純度:≥96%
γCatenin γ連環(huán)素/連接蛋白γ一抗 * 0.2ml TetrahydroLBiopterin free base
Thrap3/TRAP150 狀腺激素受體相關(guān)蛋白3一抗 * 0.2ml Tirofiban HCl
PRMT5 組蛋白精氨基轉(zhuǎn)移酶5一抗 * 0.2ml Tirofiban HCl
ELL2 聚合酶延伸因子2一抗 * 0.2ml Pullulan
Escherichka coli K88K99/ETECK88 豬源產(chǎn)腸毒素性大腸桿K88K99一抗 * 0.2ml Vitamin E,dlαtocopherol
CSTF2T/CstF64 細胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64一抗 * 0.2ml Stavudine
OGlcNAc transferase O位N乙酰葡萄糖OGT一抗 * 0.2ml Stavudine
SAP62 剪接體相關(guān)蛋白62一抗 * 0.2ml Moclobemide
磷酸化自噬相關(guān)蛋白4D抗體磷酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗體Nagilactone C中文名:別名:分子式:C19H22O7
蛋白激酶GCN2蛋白抗體Jolkil A中文名:別名:分子式:C29H36O6
生長因子受體結(jié)合蛋白10抗體Euphorbia factor L3中文名:別名:分子式:C31H38O7
磷酸化生長因子受體結(jié)合蛋白10抗體Gopherenediol中文名:別名:分子式:C20H34O2
磷酸化糖原合酶激酶3α抗體 GSK3α(Phospho-Ser21)Gelomulide A中文名:別名:分子式:C22H30O5