詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA,、HAS等,。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔,、雞,、大小鼠等,大量時需要用到狗,、綿羊,、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔,、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,,家兔,、豚鼠、大鼠,、雞可采用心臟采血,,家兔、山羊,、綿羊可采用靜脈采血,。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,,特異性強,,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量,、相對分子的質(zhì)量,、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑,。
產(chǎn)品名稱 | 錨蛋白重復結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 |
英文名稱 | ANKRD12 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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公司專業(yè)供應的抗體,,抗體是用于化學反應、分析化驗,、研究實驗,、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,,產(chǎn)品品質(zhì),,價格實惠,多種規(guī)格供應,,售后完善,。抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA,、HAS等,。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔,、雞,、大小鼠等,大量時需要用到狗,、綿羊,、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔,、綿羊,、山羊可采用靜動脈采血,,家兔、豚鼠,、大鼠,、雞可采用心臟采血,家兔,、山羊,、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,,具有高效,特異性強,,純度高的特定,。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量,、純度以及特異性,。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久,。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑,。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化,。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中,。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體,;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5,;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸,;70%乙醇,;新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液,;
2.儀器
凝膠過濾柱,;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾,。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質(zhì),,可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml,;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天),;
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低,;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2,、選擇實驗活體,。
3、進行動物免疫實驗,。
4,、試取血樣進行測試,查看免疫效果,。
5,、如果免疫成功,殺死實驗活體,,采集全部血清,。
6、純化出抗體,。
7,、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
血管生成素1ANG-1豬血管生成素1英文名稱:Porcine Angiopoietin 1, ANG-1
乙酰膽堿受體抗體AChRab豬乙酰膽堿受體抗體英文名稱:Porcine acetylcholine receptor antibody, AChRab
熱休克蛋白90HSP-90豬熱休克蛋白90英文名稱:Porcine Heat Shock Protein 90, HSP-90
熱休克蛋白70HSP-70豬熱休克蛋白70英文名稱:Porcine Heat Shock Protein 70, HSP-70
熱休克蛋白40HSP-40豬熱休克蛋白40英文名稱:Porcine Heat Shock Protein 40, HSP-40
熱休克蛋白20HSP-20豬熱休克蛋白20英文名稱:Porcine Heat Shock Protein 20, HSP-20
C反應蛋白CRP豬C反應蛋白英文名稱:Porcine C-reactive protein, CRP
可溶性細胞間粘附分子1sICAM-1豬可溶性細胞間粘附分子1英文名稱:Porcine Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1, sICAM-1
可溶性P選擇素sP-Selectin豬可溶性P選擇素英文名稱:Porcine soluble P-selectin, sP-Selectin
白介素17IL-17豬白介素17英文名稱:Porcine interleukin 17, IL-17
髓磷脂堿性蛋白MBP豬髓磷脂堿性蛋白英文名稱:Porcine myelin basic protein, MBP
生長激素釋放多肽GHRP豬生長激素釋放多肽英文名稱:Porcine Growth Hormone Releasing Peptide, GHRP
α干擾素IFN-α豬α干擾素英文名稱:Porcine Interferon α, IFN-α
磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶pERK豬磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶英文名稱:Porcine phospho-extracellular signal-regulated kinase, pERK
乙酰膽堿ACh豬乙酰膽堿英文名稱:Porcine acetylcholine, ACH
錨蛋白重復結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體Streptomyces rochei分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Bradyrhizobium japonicum提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 與大豆共生固氮,培養(yǎng)基pH4.2生長培養(yǎng)基: 0053生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法,;礦物油法
Rhizopus stolonifer分離基物: 黃油提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0017生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Alteromonas marina分離基物: 水樣/深層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 大西洋細菌培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法,;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Lactobacillus casei分離基物: 發(fā)酵牛乳提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 用于分類學研究以及發(fā)酵乳制品培養(yǎng)基: 6生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法,;真空冷凍干燥法
Aspergillus niger分離基物: 醋醅提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 釀醋用糖化菌,。培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃存儲條件: 定期移植法;其他
Auricularia molerii提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 菌種分類,,食用菌,。培養(yǎng)基: 17生長條件: 27℃存儲條件: 定期移植法
Candida tropicalis分離基物: 水樣/上層海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領域: 產(chǎn)酶微生物/植酸酶培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法
傷寒沙門氏菌種屬: Salmonla typhi提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應用領域: 噬菌體分型用 Vi 28 9,12,Vi d -培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法