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生化試劑的一些概要:N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸
生化試劑又叫生化藥品,簡稱試劑。它是工農(nóng)業(yè),、文教衛(wèi)生、科學(xué)研究以及國防建設(shè)等多方面進行化驗分析的重要藥劑,。生化試劑是指具有一定純度標(biāo)準的各種單質(zhì)和化合物(也可以是混合物,。要進行任何實驗都離不了試劑,,試劑不僅有各種狀態(tài),而且不同的試劑其性能差異很大,。有的常溫非常安定,、有的通常就很活潑,有的受高溫也不變質(zhì),、有的卻易燃易爆:有的香氣濃烈,,有的則劇毒……。只有對生化試劑的有關(guān)知識深入了解,,才能安全,、順利進行各項實驗。既可保證達到預(yù)期實驗?zāi)康?,又可消除對環(huán)境的污染,。因此,首先要知道試劑的分類情況,。然后掌握各類試劑的存放和使用,。
下面是公司生化試劑產(chǎn)品: N-叔丁氧羰基-L-丙氨酸
5-AMP瓊脂糖凝膠4B,5´-腺苷酸瓊脂糖凝膠4B,,5-AMP Sepharose 4B BR 5克 2~8℃
2′5′-ADP瓊脂糖凝膠4B,,2′5′-ADP Sepharose 4B BR 5毫升 2~8℃
明膠瓊脂糖凝膠4B,Gelatin Sepharose 4B BR 25毫升 2~8℃
GST瓊脂糖凝膠4B,,谷胱甘肽瓊脂糖凝膠4B,,Glutathione Sepharose 4B BR 5毫升 2~8℃
10毫升
精氨酸瓊脂糖凝膠4B,Arginine Sepharose 4B BR 25毫升 2~8℃
25毫升
賴氨酸瓊脂糖凝膠4B,,Lysine Sepharose 4B BR 25毫升 2~8℃
5克
瓊脂糖凝膠6B,,Sepharose 6B 分離范圍10×103~4×106 100毫升 9012-36-6 2~8℃
500毫升
100毫升
500毫升
氨基瓊脂糖凝膠4B,EAH Sepharose 4B BR 25毫升 2~8℃
25毫升
羧基瓊脂糖凝膠4B,,ECH Sepharose 4B BR 25毫升 2~8℃
25毫升
NHS活化瓊脂糖凝膠4FF,NHS活化羧基瓊脂糖凝膠4FF BR 25毫升 2~8℃
25毫升
環(huán)氧瓊脂糖凝膠6B,,Epoxy-activated Sepharose 6B BR 15克 2~8℃
10克
Con A瓊脂糖凝膠4B,,拌刀豆球蛋白瓊脂糖凝膠4B BR 25毫升 2~8℃
25毫升
苯甲脒瓊脂糖凝膠4FF,苯甲醚瓊脂糖凝膠4FF,,Benzamidine Sepharose 4 Fast Flow (high sub) BR 25毫升 2~8℃
25毫升
GST瓊脂糖凝膠4FF,,谷胱甘肽瓊脂糖凝膠4FF,Glutathione Sepharose 4FF BR 5毫升 2~8℃
10毫升
瓊脂糖凝膠4FF,,Sepharose 4FF 球蛋白分離范圍~3×107 100毫升 2~8℃
葡聚糖(線性分子):~6×106 500毫升
100毫升
500毫升
丁基瓊脂糖凝膠4FF,,Butyl Sepharose 4FF BR 25毫升 157885-28-4 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
丁基瓊脂糖凝膠4B,Butyl Sepharose 4B BR 100毫升 157885-28-4 2~8℃
25毫升
100毫升
辛基瓊脂糖凝膠4FF,,Octyl Sepharose 4FF BR 25毫升 68652-09-5 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
DNA純化瓊脂糖凝膠FF,,PlasmidSelect DNA BR 25毫升 2~8℃
DEAE瓊脂糖凝膠FF,,DEAE Sepharose FF BR 100毫升 57407-08-6 2~8℃
500毫升
100毫升
500毫升
Q瓊脂糖凝膠FF,Q Sepharose FF 分離球蛋白4×106 25毫升 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
羧甲基瓊脂糖凝膠CL-6B,,CM瓊脂糖凝膠CL-6B,,CM Sepharose CL-6B BR 25毫升 68894-07-5 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
羥甲基瓊脂糖凝膠FF,CM瓊脂糖凝膠FF,,CM Sepharose FF BR 25毫升 68894-07-5 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
SP瓊脂糖凝膠FF,,SP Sepharose Fast Flow BR 25毫升 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
鎳NTA瓊脂糖凝膠6FF,金屬鎳螯合瓊脂糖凝膠6FF,,Ni Sepharose 6 Fast Flow BR 25毫升 2~8℃
25毫升
常用生化試劑作用:
1,、蛋白酶K:能水解消化蛋白質(zhì),特別是與DNA結(jié)合的組蛋白,,在尿素和SDS中穩(wěn)定,。一般工作濃度是50—100μg/ml,推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2,。
2,、SDS:十二烷基硫酸鈉,溶解細胞膜上的脂類與蛋白質(zhì),,因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜,,并解離細胞中的核蛋白,SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀,。
3,、IPTG:異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于藍白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細菌內(nèi)的蛋白表達等,。IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似,,所以它和乳糖一樣,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合,,使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化,,四聚體解聚成單體,失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,,從而解除了阻遏蛋白的作用,,使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是,,IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解,。常與X-GAL一起用于藍白斑篩選。作用*的誘導(dǎo)劑,,不被細菌代謝而十分穩(wěn)定,。
4、X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,,是IPTG的顯色試劑,,在IPTG的催化下顯藍色,。常跟IPTG一起用與藍白斑篩選。
5,、G418:一種抗生素,,對幾乎所有的細胞都有毒性,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染zui常用的選擇試劑,。當(dāng)neo基因被整合進真核細胞基因組合適的地方后,,則能啟動neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的高效表達,,使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長,。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移,、基因敲除,、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以廣泛應(yīng)用。
6,、DMSO:二甲基亞砜,。實驗室常用于作液體層析溶劑,同時用作測試物質(zhì)紫外消光值上時用作參照物,。能溶于所有烷烴和烯烴,。
7、曲拉通X-100:TritonX-100,,用的細胞裂解液成分之一,,在保護蛋白活性方面有一定作用, 能力介于NP40和SDS之間,,偏向于NP40,。
8、NP-40:很溫和的去垢劑,,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,,而對核膜破壞的作用弱,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白,。
9,、BSA:牛血清白蛋白, 主要起維持滲透壓作用,、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用,。在動物細胞無血清培養(yǎng)中,,添加白蛋白可起到生理和機械保護作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內(nèi)參和抗體稀釋液,。
10,、甲酰胺: 甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩(wěn)定劑,,也用于穩(wěn)定毛細管電泳中的變性單股DNA。
11,、TEMED:四甲基乙二胺,。促凝劑。在中性及堿性pH條件下,,加入TEMED可加速凝膠聚合,。
12、巰基乙醇:一種強還原劑,??蛇€原蛋白二硫鍵,從而使蛋白保持溶解狀態(tài),,有利于與SDS的結(jié)合,。使蛋白解離成單個亞基。
13,、甲叉雙丙烯酰胺:N,,N'-甲叉雙丙烯酰胺,別名MBA,,又叫亞甲基雙丙烯酰胺,,次甲基雙丙烯酰胺,N,,N'-甲撐雙丙烯酰胺,。作交聯(lián)劑與丙烯酰胺聚合而制備聚丙烯酰胺凝膠。
14,、過硫酸銨:過硫酸銨(APS)的作用主要是提供自由基,,然后在促凝劑TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合。
15,、B27:一種添加劑,,用于神經(jīng)肝細胞培養(yǎng),被認為具有抑制膠質(zhì)細胞生長的作用,。
16,、DTT:二硫蘇糖醇,常用還原劑,,既有抗氧化作用,。它能保護酶分子上的還原性基團,維持還原性環(huán)境,,穩(wěn)定酶的活性,。又是一種蛋白質(zhì)變性劑,破壞二硫鍵,濃度不同,,起到的作用也不同,。
17、弗氏不*佐劑和弗氏*佐劑:弗氏*佐劑是一種油包水的乳濁液,,含結(jié)核分枝桿菌的細胞壁成分,。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續(xù)釋放,并刺激局部免疫反應(yīng),。弗氏不*佐劑用于初次免疫刺激,。為了減少副作用,不含結(jié)核分枝桿菌成分的弗氏不*佐劑用于加強弗氏*佐劑是一種油包水的乳濁液,,能夠非常有效的誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗體,。弗氏*佐劑含結(jié)核分枝桿菌的細胞壁成分,可以加強對抗原的抗體反應(yīng),。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續(xù)釋放,,并刺激局部免疫反應(yīng)。
18,、吐溫 20:Tween-20 ,,常用的非離子去垢劑。
19,、吐溫 80:weenum 80 ,,除作乳化劑外,也用作某些水中難溶藥物的增溶劑,。
20.,、十二烷基肌氨酸鈉 :脫細胞試劑,制備脫細胞組織工程支架材料,。21.PVPP:PVPP對片劑具有崩解作用,,能和各種不溶于水的藥物共容,能穩(wěn)定化各種懸浮劑,,又具有形成絡(luò)合物的能力以及吸附作用等,,因而可用作醫(yī)藥助劑。也用于除去啤酒中的多酚,。22,、PIPES:哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸),實驗室做緩沖劑用,。全名是哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸),,pKa是6.80。不參與也不干擾生物化學(xué)反應(yīng),,價格比較貴,。常用在免疫和細胞類的實驗中,,PIPES有時還被用來制備大腸桿菌感受態(tài)。23,、CTAB:十六烷基三乙基溴化銨,一種去污劑,,可溶解細胞膜,,它能與核酸形成復(fù)合物,在高鹽溶液中((0.7 mol/L NaCl)是可溶的,,當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)時,,從溶液中沉淀,通過離心就可將CTAB-核酸的復(fù)合物與蛋白,,多糖類物質(zhì)分開,。zui后通過乙醇或異丙醇沉淀DNA,而CTAB溶于乙醇或異丙醇而除去,。CTAB法是現(xiàn)在實驗室zui常用的一種提取核酸的手段,。24、HEPES:羥乙基哌秦乙硫磺酸,,一種弱酸緩沖劑,,主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變化。在開放式培養(yǎng)條件下,,培養(yǎng)基脫離了5%CO2的環(huán)境,,CO2氣體迅速逸出,pH迅速升高,,若加了HEPES,,此時可以維持pH7.0左右。一般在進行克隆化培養(yǎng)時要添加HEPES,。
25,、MOPS:一種緩沖液,有抑制RNA酶的作用,,一般和甲醛(用于變形RNA)用于RNA變性電泳,。26、鹽酸胍:鹽酸胍等可使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的氫鍵發(fā)生斷裂,,這增加了非極性分子包括氨基酸側(cè)鏈的溶解度,,減少了疏水相互作用。27,、PMSF:Phenylmethanesulfonyl fluoride,,中文名為苯甲基磺酰氟。用于抑制蛋白酶. PMSF嚴重損害呼吸道粘膜,、眼睛及皮膚,,吸入,、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,,應(yīng)立即用大量水沖洗之,。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄。PMSF在水溶液中不穩(wěn)定,。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中,。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃,。pH值為8.0時,,20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min,這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數(shù)小時后,,可安全地予以丟棄,。
28、溴酚藍:pH指示劑,,pH=3.0時呈黃色,,pH=4.6時呈藍紫色。酸堿指示劑,;非水滴定用指示劑,,蛋白電泳染色;病毒化驗等,。29,、臺盼蘭:臺盼藍(Trypan Blue)或稱臺盼蘭,是細胞活性染料,,常用于檢測細胞膜的完整性,。30、二甲苯青FF:用于瓊脂糖聚丙烯酰胺凝膠電泳的示蹤染料,, 易溶于水和醇,,可與溴芬藍按照一定比例配置loading buffer。31,、吖啶橙:是一種熒光色素,,與細胞中DNA和RNA結(jié)合量存在差別,可發(fā)出不同顏色的熒光,,與DNA結(jié)合量少發(fā)綠色熒光,,與RNA結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性,,能透過細胞膜,,使核DNA和RNA染色。在熒光顯微鏡下觀察,,吖啶橙可透過正常細胞膜,,使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光,;而在凋亡細胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,,形成凋亡小體,。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒,;而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失,。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染,因EB只染死細胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,,由此可區(qū)分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞.它還可以用作移碼突變的誘變劑,,能鑲嵌于兩個相鄰的堿基對之間,,這樣在DNA復(fù)制過程中,會使DNA鏈增加或缺失一個堿基,,造成移碼突變,。吖啶橙染液有毒,操作時要戴手套,,需避光,。32、EDTA和EGTA:EDTA--乙二胺四乙酸EDTA是螯合劑的代表性物質(zhì),。能和堿金屬,、稀土元素和過渡金屬等形成穩(wěn)定的水溶性絡(luò)合物。此外EDTA也可用來使有害放射性金屬從人體中迅速排泄起到解毒作用,。也是水的處理劑,。EGTA--乙二醇雙(2-氨基乙基)四乙酸在Mg2+存在下測定Ca2+時,可用EGTA直接滴定,滴定誤差小于0.3% ,,比用EDTA滴定提高了選擇性,。此外它與金屬離子形成的配合物的穩(wěn)定性普遍比相應(yīng)的EDTA配合物差。33,、TRICINE:N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸,, 常見的電泳系統(tǒng)是Tris-甘氨酸系統(tǒng);Tris-Tricine電泳則用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的電泳,,能夠獲得較好的分離效果,。可以用前者代替,。34,、PVP40:PVP40 中的CO - N = 有很強的結(jié)合酚類化合物的能力,與其形成穩(wěn)定的復(fù)合物,,常用于提取RNA時除去酚類,。35,、脫氧膽酸鈉:離子型去垢劑,作用有:1,、裂解細胞,;2、溶解蛋白,,尤其是可以溶解一些難溶于水的蛋白,,如膜蛋白等;3,、很適合做WB,,但在Co-IP中使用,需要謹慎,。36,、6-BA:細胞培養(yǎng)中用到,細胞分裂素,。37,、碘代乙酰胺:也叫作碘乙酰胺,2-碘乙酰胺,。用于有機合成,,在蛋白組學(xué)中組氨酸和半胱氨酸的烷基化試劑,用于多肽測序以及酶抑制劑等,,蛋白組學(xué)級試劑,。38、萘乙酸:NAA,,為廣譜性植物生長調(diào)節(jié)劑,。可促進細胞分裂,,誘導(dǎo)形成不定根,,改變雌雄花比例,增加坐果率等39,。番紅O與藏紅T:氧化還原指示劑,、生物染色、酸堿指示劑,,滴定分析亞硝酸鹽,。40。TTC:2,,3,,5-三苯基氯化四氮唑(紅四氮唑),多用于藥物分析和瓊脂糖添加劑,,在計數(shù)瓊脂中加入適量的TTC(0.5% TTC 1ML加到100ML瓊脂中),,細菌菌落長成紅顏色,,對去除食品本底顆粒物干擾非常有意義。