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elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)條件的選擇
閱讀:646 發(fā)布時(shí)間:2016-7-8 ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),,得到*科研工作者的認(rèn)可及推崇,,在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣,,尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。
Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,,特異性強(qiáng),,重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定,、易保存,,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,。ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。
在ELISA中,,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),,觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),,要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時(shí),。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度,。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度,。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉,、安全、有明顯地顯色反應(yīng),,而本身無(wú)色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù),。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時(shí)間后,,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,,以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入,。
Meis homeobox 3 同源盒蛋白MEIS3抗體
Myotrophin 顆粒細(xì)胞分化蛋白抗體
Monoamine oxidase A+B 單氨氧化酶A+B抗體
MIR16 膜蛋白相互作用蛋白R(shí)GS16抗體
Matriptase 2 膜型絲氨酸蛋白酶2抗體
MRP8+MRP14 多藥耐藥相關(guān)蛋白8/9/14抗體
MOBKL2B Mob1同源蛋白MOBKL2B抗體
MOBKL2C Mob1同源蛋白MOBKL2C抗體
MEGF5 復(fù)合型表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體
MYLIP 低密度脂蛋白受體的誘導(dǎo)降解蛋白抗體
ZNF144 鋅指蛋白144抗體