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細胞增殖與IL-2量呈正比
閱讀：385 發(fā)布時間：2014-8-5這是一類利用細胞因子的基因探針檢測特定細胞因子基因表達的技術(shù)。目前所有*的細胞因子的基因均已克隆化，故能較容易地得到某一細胞因子的cDNA探針或根據(jù)已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測細胞因子mRNA表達的方法多種多樣,，常使用斑點雜交,、Northern blot、逆轉(zhuǎn)錄PCR,，細胞或組織原位雜交等,。實驗的關(guān)鍵在于制備高質(zhì)量的核酸探針和獲得合格的待測物（提取的mRNA樣品或細胞/組織標本）。
核酸探針是指一段用放射性同位素或其他標記物（如生物素,、等）標記并與目的基因互補的DNA段或單鏈DNA,、RNA。根據(jù)其來源可分為cDNA探針,、寡核核苷酸探針,、基因組基因探針及DNA探針等。其中cDNA探針和人工合成寡核苷酸探針常用于斑點雜交及Northern blot,，而RNA探針因穿透性好更適用于原位雜交,。核酸探針技術(shù)的應(yīng)用已經(jīng)程序化，以cDNA探針為例主要包括：①質(zhì)粒DNA的提??；②靶DN段的分離；③靶DN段標記,；④待測樣品mrna的提?。虎輼擞沜DNA探針對待檢樣品的雜交,；⑥放射自顯影或顯色分析,。近年來出現(xiàn)的RT-PCR檢測特異性mRNA的方法也廣泛用于細胞因子研究領(lǐng)域。該法具有靈敏,、快速等優(yōu)點,，甚至從1～10個細胞中就可檢出其中的特異mRNA。
1．細胞增殖法
許多細胞因子具有細胞生長因子活性,，特別是白細胞介素,，如IL-2激t細胞生長、IL-3激肥大細胞生長,、IL-6激漿細胞生長等,。利用這一特性,，現(xiàn)已篩選出一些對特定細胞因子起反應(yīng)的細胞，并建立了只依賴于某種因子的細胞系,，即依賴細胞株（簡稱依賴株）,。這些依賴株在通常情況下不能存活，只有在加入特定因子后才能增殖,。例如IL-2依賴株ctll-2在不含IL-2的培養(yǎng)基中很快死亡,，而加入IL-2后則可右體外長期培養(yǎng)。在一定濃度范圍內(nèi),，因此通過測定細胞增殖情況（如使用3h-tdr摻入法,、MTT法等）鑒定IL-2的含量。除依賴株外,，還有一些短期培養(yǎng)的細胞,，如胸腺細胞、骨髓細胞,、促有絲分裂原激后的淋巴母細胞等,，均可作為靶細胞來測定某種細胞因子活性。
2．靶細胞殺傷法
是根據(jù)某些細胞因子（如TNF）能在體外殺傷靶細胞而設(shè)計的檢測方法,。通常靶細胞多選擇體外長期傳代的腫瘤細胞株,，利用同位素釋放法或染料染色等方法判定細胞的殺傷率。
目前,，幾乎所有常見細胞因子的檢測試劑盒均有商品供應(yīng),。此外還可利用酶標或熒光標記的抗細胞因子單克隆抗體，原位檢測因子在細胞內(nèi)的合成及分布情況,，如近來來發(fā)展起來的細胞內(nèi)染色法和酶聯(lián)免疫斑點（ELISPOT）技術(shù)等,。免疫學(xué)檢測法可直接測定樣品中特定細胞因子的含量（用ng/ml表示），為大規(guī)模檢測臨床病人血清中細胞因子的含量提供了方便,。本法僅測定細胞因子的抗原性,，與該因子活性不一定相平行，因此要了解細胞因子的生物學(xué)效應(yīng),，必須結(jié)合生物學(xué)檢測法,。