詳細(xì)介紹
產(chǎn)品分類:酶類染色
儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月
用途:細(xì)胞色素氧化酶染色
注意事項(xiàng):主要由Co孵育液、Lugol碘液,、硫代硫suan鈉溶液,、鈷鹽溶液、陰性對照等組成,染色后酶活性部位呈棕綠色,。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠,、效果穩(wěn)定、靈敏度高,、操作簡單,、易保存等特點(diǎn),咨詢并訂購,!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
細(xì)胞色素氧化酶染色液 | 4×50ml | FS-R6765 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1,、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,,是一種白色晶體粉末,,常用H4Y表示,溶解度很小,,室溫溶解度為0.02g/100g H2O,。
2,、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,,然后用水洗凈,,烘干。
配制步驟:
1,、取適量鋅片放在100mL燒杯中,,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水,、純水洗凈,,烘干、冷卻,。
2,、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿,。
3,、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿,、杯壁,,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,,搖勻,。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,,作為對照品溶液,。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃,;進(jìn)樣口溫度250℃,;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,,分流比10:1,。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對照品溶液,,一份置冷處保存,,一份置室溫中保存,在第1,、3,、7、10,、15天重新配制一份對照品溶液,,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液,。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量,。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,,驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠,。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),,即劑量反應(yīng)性曲線,,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL,;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL,。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實(shí)現(xiàn),,至少選擇5個(gè)濃度,。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,,CO2培養(yǎng)過夜,;注:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量,。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,,可設(shè)定50,,100,250,,500,,750,1000μg/mL,。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔,。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度,。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度,。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代),。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷,。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會(huì)降低,。為了得到較好的篩選效果,,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r,。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,,轉(zhuǎn)染,,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天,。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
常春藤苷D Quinine hydrochloride dihydrate支架蛋白抗體包裝5g
常春藤苷H;灰氈毛忍冬次皂苷 1-METHYL-1,2,4-TRIAZOLE洲爪蟾IGC抗體包裝25g
常春藤皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品) Picoplatin干擾誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗體包裝5g
常春藤皂苷元-28-O-β-D-葡萄糖酯苷 4-NitrobenziMidaMide HCl干擾β抗體包裝100g
常山(標(biāo)準(zhǔn)品) Ureaγ-干擾/γ-IFN單克抗體包裝25g
巢脾(標(biāo)準(zhǔn)品) Dehydronandrolon干擾-γ/IFN-γ抗體包裝5g
朝藿定A(標(biāo)準(zhǔn)品) Fumaric acid干擾-γ/IFN-γ抗體包裝1g
朝藿定A1(標(biāo)準(zhǔn)品) Danofloxacin mesylate胰島樣生長因子I受體抗體包裝5g
朝藿定C(標(biāo)準(zhǔn)品) Danofloxacin mesylate胰島樣生長因子1受體抗體包裝1g
車前草(標(biāo)準(zhǔn)品) Calcium Alginate胰島樣生長因子結(jié)合蛋白2抗體包裝25g
車前草(車前)(標(biāo)準(zhǔn)品) Mephenoxalone胰島樣生長因子結(jié)合蛋白5抗體包裝5g
車前草苷D Lecithin胰島樣生長因子1抗體包裝250mg
車前子(車前)(標(biāo)準(zhǔn)品) Lecithin from egg胰島樣生長因子-II抗體包裝1g
車葉草苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Vilanterol;GW642444白介10抗體包裝5g
沉香(標(biāo)準(zhǔn)品) PD-98059白介13抗體包裝100mg
優(yōu)雅食烷菌Alcanivorax│venustensis 質(zhì)量規(guī)格:單酯含量大于40%可溶性胸苷激1試劑盒槲皮-7-O-葡萄糖苷;Quercet
: AS1.16資源名稱: 蘇云金芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:純度≥50%,油狀液體可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1試劑盒葒草苷;Orientin
球孢鏈霉菌Streptomyces│globisporus 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%,BR可溶性間皮相關(guān)肽試劑盒;Tetrodotoxin
細(xì)胞色素氧化酶染色液IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-mouse,、rat 干擾su-γ多肽抗原(大,、小鼠)規(guī)格: 0.5mg
IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-Human 干擾su-γ多肽抗原(人)規(guī)格: 0.5mg
IFN- Beta (Interferon Beta)mouse,rat 干擾su-β抗原規(guī)格: 0.5mg
IFN- Beta (Interferon Beta)human 干擾su-β抗原規(guī)格: 0.5mg
PSCA (Prostate Stem Cell gen) 前列腺干細(xì)胞抗原規(guī)格: 0.5mg