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生化試劑的一些概要:對(duì)硝基苯胺
生化試劑又叫生化藥品,,簡(jiǎn)稱試劑,。它是工農(nóng)業(yè),、文教衛(wèi)生、科學(xué)研究以及國(guó)防建設(shè)等多方面進(jìn)行化驗(yàn)分析的重要藥劑,。生化試劑是指具有一定純度標(biāo)準(zhǔn)的各種單質(zhì)和化合物(也可以是混合物,。要進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)都離不了試劑,試劑不僅有各種狀態(tài),,而且不同的試劑其性能差異很大,。有的常溫非常安定、有的通常就很活潑,,有的受高溫也不變質(zhì),、有的卻易燃易爆:有的香氣濃烈,有的則劇毒……,。只有對(duì)生化試劑的有關(guān)知識(shí)深入了解,才能安全,、順利進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn),。既可保證達(dá)到預(yù)期實(shí)驗(yàn)?zāi)康模挚上龑?duì)環(huán)境的污染,。因此,,首先要知道試劑的分類情況。然后掌握各類試劑的存放和使用,。
下面是公司生化試劑產(chǎn)品:對(duì)硝基苯胺
5-AMP瓊脂糖凝膠4B,,5´-腺苷酸瓊脂糖凝膠4B,5-AMP Sepharose 4B BR 5克 2~8℃
2′5′-ADP瓊脂糖凝膠4B,,2′5′-ADP Sepharose 4B BR 5毫升 2~8℃
明膠瓊脂糖凝膠4B,,Gelatin Sepharose 4B BR 25毫升 2~8℃
GST瓊脂糖凝膠4B,谷胱甘肽瓊脂糖凝膠4B,,Glutathione Sepharose 4B BR 5毫升 2~8℃
10毫升
精氨酸瓊脂糖凝膠4B,,Arginine Sepharose 4B BR 25毫升 2~8℃
25毫升
賴氨酸瓊脂糖凝膠4B,Lysine Sepharose 4B BR 25毫升 2~8℃
5克
瓊脂糖凝膠6B,,Sepharose 6B 分離范圍10×103~4×106 100毫升 9012-36-6 2~8℃
500毫升
100毫升
500毫升
氨基瓊脂糖凝膠4B,,EAH Sepharose 4B BR 25毫升 2~8℃
25毫升
羧基瓊脂糖凝膠4B,ECH Sepharose 4B BR 25毫升 2~8℃
25毫升
NHS活化瓊脂糖凝膠4FF,,NHS活化羧基瓊脂糖凝膠4FF BR 25毫升 2~8℃
25毫升
環(huán)氧瓊脂糖凝膠6B,,Epoxy-activated Sepharose 6B BR 15克 2~8℃
10克
Con A瓊脂糖凝膠4B,拌刀豆球蛋白瓊脂糖凝膠4B BR 25毫升 2~8℃
25毫升
苯甲脒瓊脂糖凝膠4FF,,苯甲醚瓊脂糖凝膠4FF,,Benzamidine Sepharose 4 Fast Flow (high sub) BR 25毫升 2~8℃
25毫升
GST瓊脂糖凝膠4FF,,谷胱甘肽瓊脂糖凝膠4FF,Glutathione Sepharose 4FF BR 5毫升 2~8℃
10毫升
瓊脂糖凝膠4FF,,Sepharose 4FF 球蛋白分離范圍~3×107 100毫升 2~8℃
葡聚糖(線性分子):~6×106 500毫升
100毫升
500毫升
丁基瓊脂糖凝膠4FF,,Butyl Sepharose 4FF BR 25毫升 157885-28-4 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
丁基瓊脂糖凝膠4B,Butyl Sepharose 4B BR 100毫升 157885-28-4 2~8℃
25毫升
100毫升
辛基瓊脂糖凝膠4FF,,Octyl Sepharose 4FF BR 25毫升 68652-09-5 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
DNA純化瓊脂糖凝膠FF,,PlasmidSelect DNA BR 25毫升 2~8℃
DEAE瓊脂糖凝膠FF,DEAE Sepharose FF BR 100毫升 57407-08-6 2~8℃
500毫升
100毫升
500毫升
Q瓊脂糖凝膠FF,,Q Sepharose FF 分離球蛋白4×106 25毫升 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
羧甲基瓊脂糖凝膠CL-6B,,CM瓊脂糖凝膠CL-6B,CM Sepharose CL-6B BR 25毫升 68894-07-5 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
羥甲基瓊脂糖凝膠FF,,CM瓊脂糖凝膠FF,,CM Sepharose FF BR 25毫升 68894-07-5 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
SP瓊脂糖凝膠FF,SP Sepharose Fast Flow BR 25毫升 2~8℃
100毫升
25毫升
100毫升
鎳NTA瓊脂糖凝膠6FF,,金屬鎳螯合瓊脂糖凝膠6FF,,Ni Sepharose 6 Fast Flow BR 25毫升 2~8℃
25毫升
常用生化試劑作用:
1、蛋白酶K:能水解消化蛋白質(zhì),,特別是與DNA結(jié)合的組蛋白,,在尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml,,推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2,。
2、SDS:十二烷基硫酸鈉,,溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì),,因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜,并解離細(xì)胞中的核蛋白,,SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀,。
3、IPTG:異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,, 常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等,。IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似,所以它和乳糖一樣,,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合,,使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化,四聚體解聚成單體,,失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,,從而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是,,IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解,。常與X-GAL一起用于藍(lán)白斑篩選。作用*的誘導(dǎo)劑,,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,。
4、X-gal:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,,是IPTG的顯色試劑,,在IPTG的催化下顯藍(lán)色。常跟IPTG一起用與藍(lán)白斑篩選,。
5,、G418:一種抗生素,對(duì)幾乎所有的細(xì)胞都有毒性,,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染zui常用的選擇試劑,。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組合適的地方后,則能啟動(dòng)neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA,,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的高效表達(dá),,使細(xì)胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。G418的這一選擇特性 ,,已在基因轉(zhuǎn)移,、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等方面得以廣泛應(yīng)用,。
6、DMSO:二甲基亞砜,。實(shí)驗(yàn)室常用于作液體層析溶劑,,同時(shí)用作測(cè)試物質(zhì)紫外消光值上時(shí)用作參照物。能溶于所有烷烴和烯烴,。
7,、曲拉通X-100:TritonX-100,用的細(xì)胞裂解液成分之一,,在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用,, 能力介于NP40和SDS之間,偏向于NP40,。
8,、NP-40:很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,,而對(duì)核膜破壞的作用弱,,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。
9、BSA:牛血清白蛋白,, 主要起維持滲透壓作用,、PH緩沖作用、載體作用和營(yíng)養(yǎng)作用,。在動(dòng)物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中,,添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。常用于蛋白定量中的內(nèi)參和抗體稀釋液,。
10,、甲酰胺: 甲酰胺被用作凝膠電泳中RNA的穩(wěn)定劑,也用于穩(wěn)定毛細(xì)管電泳中的變性單股DNA,。
11,、TEMED:四甲基乙二胺。促凝劑,。在中性及堿性pH條件下,,加入TEMED可加速凝膠聚合。
12,、巰基乙醇:一種強(qiáng)還原劑,。可還原蛋白二硫鍵,,從而使蛋白保持溶解狀態(tài),,有利于與SDS的結(jié)合。使蛋白解離成單個(gè)亞基,。
13,、甲叉雙丙烯酰胺:N,N'-甲叉雙丙烯酰胺,,別名MBA,,又叫亞甲基雙丙烯酰胺,次甲基雙丙烯酰胺,,N,,N'-甲撐雙丙烯酰胺。作交聯(lián)劑與丙烯酰胺聚合而制備聚丙烯酰胺凝膠,。
14,、過硫酸銨:過硫酸銨(APS)的作用主要是提供自由基,然后在促凝劑TEMED的作用下使丙烯酰胺及甲叉丙烯酰胺聚合,。
15,、B27:一種添加劑,用于神經(jīng)肝細(xì)胞培養(yǎng),,被認(rèn)為具有抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,。
16,、DTT:二硫蘇糖醇,常用還原劑,,既有抗氧化作用,。它能保護(hù)酶分子上的還原性基團(tuán),維持還原性環(huán)境,,穩(wěn)定酶的活性,。又是一種蛋白質(zhì)變性劑,破壞二硫鍵,,濃度不同,,起到的作用也不同。
17,、弗氏不*佐劑和弗氏*佐劑:弗氏*佐劑是一種油包水的乳濁液,,含結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁成分。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續(xù)釋放,,并刺激局部免疫反應(yīng),。弗氏不*佐劑用于初次免疫刺激。為了減少副作用,,不含結(jié)核分枝桿菌成分的弗氏不*佐劑用于加強(qiáng)弗氏*佐劑是一種油包水的乳濁液,,能夠非常有效的誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗體。弗氏*佐劑含結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁成分,,可以加強(qiáng)對(duì)抗原的抗體反應(yīng),。佐劑活性來自于油滴中免疫原的持續(xù)釋放,并刺激局部免疫反應(yīng),。
18,、吐溫 20:Tween-20 ,常用的非離子去垢劑,。
19,、吐溫 80:weenum 80 ,除作乳化劑外,,也用作某些水中難溶藥物的增溶劑,。
20.,、十二烷基肌氨酸鈉 :脫細(xì)胞試劑,,制備脫細(xì)胞組織工程支架材料。21.PVPP:PVPP對(duì)片劑具有崩解作用,,能和各種不溶于水的藥物共容,,能穩(wěn)定化各種懸浮劑,又具有形成絡(luò)合物的能力以及吸附作用等,,因而可用作醫(yī)藥助劑,。也用于除去啤酒中的多酚。22、PIPES:哌嗪-N,,N'-二(2-乙磺酸),實(shí)驗(yàn)室做緩沖劑用,。全名是哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸),pKa是6.80,。不參與也不干擾生物化學(xué)反應(yīng),,價(jià)格比較貴。常用在免疫和細(xì)胞類的實(shí)驗(yàn)中,,PIPES有時(shí)還被用來制備大腸桿菌感受態(tài),。23、CTAB:十六烷基三乙基溴化銨,,一種去污劑,,可溶解細(xì)胞膜,它能與核酸形成復(fù)合物,,在高鹽溶液中((0.7 mol/L NaCl)是可溶的,,當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)時(shí),從溶液中沉淀,,通過離心就可將CTAB-核酸的復(fù)合物與蛋白,,多糖類物質(zhì)分開。zui后通過乙醇或異丙醇沉淀DNA,,而CTAB溶于乙醇或異丙醇而除去,。CTAB法是現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室zui常用的一種提取核酸的手段。24,、HEPES:羥乙基哌秦乙硫磺酸,,一種弱酸緩沖劑,主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變化,。在開放式培養(yǎng)條件下,,培養(yǎng)基脫離了5%CO2的環(huán)境,CO2氣體迅速逸出,,pH迅速升高,,若加了HEPES,此時(shí)可以維持pH7.0左右,。一般在進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時(shí)要添加HEPES,。
25、MOPS:一種緩沖液,,有抑制RNA酶的作用,,一般和甲醛(用于變形RNA)用于RNA變性電泳。26,、鹽酸胍:鹽酸胍等可使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的氫鍵發(fā)生斷裂,,這增加了非極性分子包括氨基酸側(cè)鏈的溶解度,,減少了疏水相互作用。27,、PMSF:Phenylmethanesulfonyl fluoride,,中文名為苯甲基磺酰氟。用于抑制蛋白酶. PMSF嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜,、眼睛及皮膚,,吸入、吞進(jìn)或通過皮膚吸收后有致命危險(xiǎn),。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,,應(yīng)立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應(yīng)予丟棄,。PMSF在水溶液中不穩(wěn)定,。應(yīng)在使用前從貯存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快,,且25℃的失活速率高于4℃,。pH值為8.0時(shí),20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min,,這表明將PMSF溶液調(diào)節(jié)為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數(shù)小時(shí)后,,可安全地予以丟棄。
28,、溴酚藍(lán):pH指示劑,,pH=3.0時(shí)呈黃色,pH=4.6時(shí)呈藍(lán)紫色,。酸堿指示劑,;非水滴定用指示劑,蛋白電泳染色,;病毒化驗(yàn)等,。29、臺(tái)盼蘭:臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue)或稱臺(tái)盼蘭,,是細(xì)胞活性染料,,常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性。30,、二甲苯青FF:用于瓊脂糖聚丙烯酰胺凝膠電泳的示蹤染料,, 易溶于水和醇,可與溴芬藍(lán)按照一定比例配置loading buffer,。31,、吖啶橙:是一種熒光色素,,與細(xì)胞中DNA和RNA結(jié)合量存在差別,,可發(fā)出不同顏色的熒光,,與DNA結(jié)合量少發(fā)綠色熒光,與RNA結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光,。該染料具有膜通透性,,能透過細(xì)胞膜,使核DNA和RNA染色,。在熒光顯微鏡下觀察,,吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜,使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光,;而在凋亡細(xì)胞中,,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體,。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失,。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染,,因EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,由此可區(qū)分出正常細(xì)胞,、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞.它還可以用作移碼突變的誘變劑,,能鑲嵌于兩個(gè)相鄰的堿基對(duì)之間,這樣在DNA復(fù)制過程中,,會(huì)使DNA鏈增加或缺失一個(gè)堿基,,造成移碼突變。吖啶橙染液有毒,,操作時(shí)要戴手套,,需避光。32,、EDTA和EGTA:EDTA--乙二胺四乙酸EDTA是螯合劑的代表性物質(zhì),。能和堿金屬、稀土元素和過渡金屬等形成穩(wěn)定的水溶性絡(luò)合物,。此外EDTA也可用來使有害放射性金屬?gòu)娜梭w中迅速排泄起到解毒作用,。也是水的處理劑。EGTA--乙二醇雙(2-氨基乙基)四乙酸在Mg2+存在下測(cè)定Ca2+時(shí),,可用EGTA直接滴定,滴定誤差小于0.3% ,,比用EDTA滴定提高了選擇性。此外它與金屬離子形成的配合物的穩(wěn)定性普遍比相應(yīng)的EDTA配合物差,。33,、TRICINE:N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸, 常見的電泳系統(tǒng)是Tris-甘氨酸系統(tǒng),;Tris-Tricine電泳則用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的電泳,,能夠獲得較好的分離效果,。可以用前者代替,。34,、PVP40:PVP40 中的CO - N = 有很強(qiáng)的結(jié)合酚類化合物的能力,與其形成穩(wěn)定的復(fù)合物,,常用于提取RNA時(shí)除去酚類,。35、脫氧膽酸鈉:離子型去垢劑,,作用有:1,、裂解細(xì)胞;2,、溶解蛋白,,尤其是可以溶解一些難溶于水的蛋白,如膜蛋白等,;3,、很適合做WB,但在Co-IP中使用,,需要謹(jǐn)慎,。36、6-BA:細(xì)胞培養(yǎng)中用到,,細(xì)胞分裂素,。37、碘代乙酰胺:也叫作碘乙酰胺,,2-碘乙酰胺,。用于有機(jī)合成,在蛋白組學(xué)中組氨酸和半胱氨酸的烷基化試劑,,用于多肽測(cè)序以及酶抑制劑等,,蛋白組學(xué)級(jí)試劑。38,、萘乙酸:NAA,,為廣譜性植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑??纱龠M(jìn)細(xì)胞分裂,,誘導(dǎo)形成不定根,改變雌雄花比例,,增加坐果率等39,。番紅O與藏紅T:氧化還原指示劑、生物染色、酸堿指示劑,,滴定分析亞硝酸鹽,。40。TTC:2,,3,5-三苯基氯化四氮唑(紅四氮唑),,多用于藥物分析和瓊脂糖添加劑,,在計(jì)數(shù)瓊脂中加入適量的TTC(0.5% TTC 1ML加到100ML瓊脂中),細(xì)菌菌落長(zhǎng)成紅顏色,,對(duì)去除食品本底顆粒物干擾非常有意義,。