豬偽狂犬 gE 抗體ELISA 檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

英文名稱：ELISA Kit for detection of antibody against Pseudorabies virus gE glycoprotein

【規(guī)格】

96T×2/盒

【作用與用途】

測定豬血清中豬偽狂犬 gE 抗體,，用于偽狂犬病毒gE 基因缺失疫苗免疫豬與自然感染豬的鑒別診斷

【自備器材】

1．酶標儀，雙波長 450/630nm 濾光片

2．精q的微量移液器（單道 1-100μl,、0.5-10μl,、多道 30-300μl）

3．水浴箱或恒溫箱

4．微量振蕩器

5．洗液吸移裝置

6．一次性槍頭（10μl，200μl）

7．去離子水

【主要組成成份】

【樣本要求】

1．本試劑檢測的樣本為豬血清,，樣本應無菌采集,，2℃～8℃貯存應不超過一周,，長期應在-20℃以下保存。

【實驗準備】

1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前,，先取出置室溫 30min,，可以獲得J結果。

2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作 40 倍稀釋（即：5μl 血清加 195μl 樣品稀釋液）,，混合均勻,。

3．陽性對照陰性對照稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將陽性對照血清和陰性對照血清作4倍稀釋（即：50μl血清加150μl樣本稀釋液），混合均勻,。

4．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋 20 倍（即 1ml 濃縮洗滌液加 19ml 水）,，即可使用。注意：使用前要使結晶*溶解,。

 【檢驗方法】

1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量,，取所需板條，檢測時,，設陰,、陽性對照各 2 孔，分別加入稀釋后的陰,、陽性對照血清 100μl 于相應孔中。其余為樣本孔,，每孔加 100μl 用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）,。

 2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜,，置 37℃溫育 30 分鐘,。

 3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反

應板孔,，靜置 10 秒甩出,，洗滌 3 次，后

一次洗滌后在吸水紙上拍干,。

 4．加酶：每孔加酶標記物 100μl,。

 5．溫育：加好酶標記物的反應板蓋好蓋板

膜，置 37℃溫育 30 分鐘,。

 6．洗板：同步驟 3,。

 7．顯色：每孔加顯色劑 100μl，振蕩混勻,，

37℃避光反應 10 分鐘,。

 8．終止：每孔加終止液 50μl，振蕩 10 秒,，

充分混勻,，終止后即讀數(shù),。

9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD 值）,。

【結果判定】

在酶標儀上測各孔的 OD 值,。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均 OD 值≥0.5，陰性對照孔的平均 OD 值必須＜0.1,；樣品中抗體存在與否,，或樣本中抗體的相對水平的高低由 S/P 值決定，S/P 值計算時按以下方式處理:

S/P=(樣本 OD450/630 值-NCx)/（PCx-NCx),，

其中 NCx表示陰性對照孔平均 OD450/630 值

（0.05 以下的數(shù)值按 0.05 計算）,；PCx表示陽性對照孔平均 OD450/630 值；

當樣本的 S/P≥0. 25時判為陽性,；樣品 S/P 值＜0.25時判為陰性,；

【注意事項】

1．本試劑盒僅供研究使用。

 2．不要使用過期的試劑盒組分,，不要把不同

批次的組分混合使用,。

 3．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說明書,。

 4．使用前,，濃縮的洗滌液應恢復至室溫

（20～25℃），并搖動使沉淀溶解（hao在

37℃水浴鍋中加熱5～10分鐘）,，然后用去離

子水作 20倍稀釋（例如：50ml的濃縮洗滌液

加上 950ml 蒸餾水）,，混勻，稀釋好的洗滌

液在 2～8℃可以存放 7-10 日,。

 5．本試劑盒應按含有傳染性材料對待,，試驗廢棄物應經(jīng) 121℃高壓蒸汽滅菌 30 分鐘，或5.0g/L 次氯酸鈉等消毒劑處理 30 分鐘后廢棄,。

 6．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應在室溫中平

衡至潮氣干盡后方可拆開,，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封 2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋,，與其它配套組份放入試劑盒中于 2℃-8℃避光保存,。

 7．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常

校對其準確性,。

 8．加洗滌液時應做到滿而不溢,，防止孔口有

游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

 9．終止液有腐蝕性,，若濺到皮膚或衣物上應

立即用大量清水沖洗干凈,。

【儲存條件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷凍,，有期

12 個月,。

【生產(chǎn)日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒,。

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