貨號：YC1205                                                   規(guī)格：100管/96樣

總抗氧化能力（Total antioxidant capacity,，T-AOC）試劑盒說明書

微量法

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

研究意義：

測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué),、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測血漿,、血清、唾液,、尿液等各種體液,，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力,。

測定原理：

在酸性環(huán)境下,，還原 Fe³⁺-三吡啶三吖嗪(Fe³⁺-TPTZ)產(chǎn)生藍色的 Fe²⁺-TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。

自備實驗用品：

恒溫水浴鍋,、低溫離心機,、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶,，使用前預(yù)冷。

試劑一：液體 15mL×1 瓶,，避光保存,。

試劑二：液體 1.5mL×1 瓶,，4℃避光保存。

試劑三：液體 1.5mL×1 瓶,，避光保存,。

混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一、試劑二,、試劑三按10:1:1的比例混合,，使用前37℃預(yù)溫。

樣品的制備：

(1) 血清,、血漿,、唾液或尿液等液體樣品

血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃,，5000rpm 離心10min，取上清待測,。血清,、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超30d）后再測定,。

(2) 組織樣品

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g,，4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。

(3) 細(xì)胞樣品

按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液）,，冰浴超聲波破碎（功率200W，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次）；10000g,，4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。

操作步驟：

1,、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至593nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、操作表

注意：空白管只需測定一次,。

總抗氧化能力計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.6308x+0.1291,，R²=0.9989

（1）按樣本質(zhì)量計算

總抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷ 0.6308×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)

=53.9×（△A-0.1291）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

總抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反總÷(V 樣×Cpr)

=53.9×（△A-0.1291）÷Cpr

（3）按細(xì)胞計算

總抗氧化能力（U/10⁴cell）=（△A-0.1291）÷0.6308×V反總÷V樣×V樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個）

（4）按液體體積計算

總抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.6308×V 反總÷V 樣= 53.9×（△A-0.1291）

V 樣總：加入提取液體積，1 mL,； V 反總：反應(yīng)總體積,，204μL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積,，

6μL,；W：樣品質(zhì)量，g,；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/mL

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.3154x+0.1291；R²=0.9989

（1）按樣本質(zhì)量計算

總抗氧化能力（U/g）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)

=107.8×（△A-0.1291）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

總抗氧化能力（U/mg prot）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反總÷(V 樣×Cpr)

=107.8×（△A-0.1291）÷Cpr

(3) 按細(xì)胞計算

總抗氧化能力（U/10⁴cell）=（△A-0.1291）÷0.3154×V反總÷V樣×V樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）= 107.8×（△A-0.1291）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個）

（4）按液體體積計算

總抗氧化能力（U/mL）=（△A-0.1291）÷0.3154×V 反總÷V 樣= 107.8×（△A-0.1291）

V 樣總：加入提取液體積,，1 mL,； V 反總：反應(yīng)總體積，204μL,；V 樣：反應(yīng)中樣品體積,，

6μL；W：樣品質(zhì)量,，g,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

注意事項：

1. 試劑二對人體有刺激性,，請采取適當(dāng)?shù)姆雷o措施,。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴乳膠手套操作,。

2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的試劑,，否則對本試劑盒的檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾。

3. 樣品中不宜添加 Tween,、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT,、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的還原劑。

4. 如果樣品測定出來的吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍以外,，需把樣品適當(dāng)稀釋或濃縮后再進行測定,。

5. 試劑盒 2-8℃保存。

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