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糖原含量試劑盒說明書

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所在地上海市

更新時(shí)間:2025-02-18 08:29:27瀏覽次數(shù):1864次

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供貨周期 一周 規(guī)格 100管/96樣
貨號(hào) YC1131
糖原含量試劑盒測(cè)定原理:
蒽酮法,。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原,,在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測(cè)定糖原含量。

貨號(hào):YC1131                                                 規(guī)格:100管/96樣

糖原含量試劑盒說明書

微量法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

糖原是由葡萄糖單位構(gòu)成的高分子多糖,,是糖的主要的儲(chǔ)存形式之一,,主要貯存在肝和肌肉中作為備用能量,分別稱為肝糖原和肌糖原,。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度,,當(dāng)血糖升高時(shí)可在肝

臟合成糖原,血糖降低時(shí),,肝糖原則分解為葡萄糖以補(bǔ)充血糖,。因此,肝糖原對(duì)維持血糖的相對(duì)平衡十分重要,。肌糖原是肌肉中糖的儲(chǔ)存形式,在劇烈運(yùn)動(dòng)消耗大量血糖時(shí),,肌糖原不能直接分解成血糖,必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過糖異生轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚱咸烟恰?/span>

測(cè)定原理:

蒽酮法,。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原,,在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測(cè)定糖原含量。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板,、濃硫酸(不允許快遞)和蒸餾水,。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存,;

試劑一:0.1mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 10mL×1 瓶,,4℃保存;

試劑二:粉劑×1 瓶,, 4℃保存,;

糖原提取:

1﹑細(xì)胞或細(xì)菌:收集500~1000萬細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),,離心后棄上清,;加入0.75mL提取液超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%或200W,,超聲3s,間隔10s,,重復(fù)30次);轉(zhuǎn)移至10mL試管中,,95℃水浴20min(蓋緊,防止水分散失),,隔5min振搖試管1次,,使充分混勻;取出試管冷卻后,,用蒸餾水定容到5ml,混勻,,8000g 25℃離心10min,取上清液待測(cè),。

2﹑組織:稱取0.1~0.2g樣品,加入0.75ml 提取液充分勻漿,;轉(zhuǎn)移至10ml試管中,;95℃水浴 20min(蓋緊,,防止水分散失),隔5min振搖試管1次,,使充分混勻,;待組織全部溶解后,取出試管冷卻后,,用蒸餾水定容到5ml,,混勻,8000g 25℃離心10min,,取上清液待測(cè),。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm,,蒸餾水調(diào)零。

2,、調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃,。

3、試劑二工作液的配制:在試劑二中倒入6mL蒸餾水,,緩慢倒入24mL濃硫酸,,充分溶解混勻后使用,;用不完的試劑4℃保存一周,;

4,、加樣表(在 EP 管中反應(yīng)) :

試劑(μL)

空白管  

標(biāo)準(zhǔn)管  

測(cè)定管

待測(cè)樣本  

 

 

60

試劑一

 

60

 

蒸餾水  

60

 

 

試劑二  

240  

240  

240

混勻,,置95℃水浴10min(蓋緊,,防止水分散失),冷卻,,取200μL轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或 96孔板中,于620nm波長(zhǎng)處,,分別讀取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光度,,分別記為 A1、A2 和 A3,。

注意:1、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要測(cè)一次,。

2,、如果 A3-A1大于2,,需要將樣本用蒸餾水稀釋,,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

糖原含量的計(jì)算:

1,、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

糖原(mg/g 鮮重)=1.11×(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

= 0.555×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

2,、按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

糖原(mg/mg prot)=1.11×(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)

=0.111×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷Cpr

1.11:是此法測(cè)得葡萄糖含量換算為糖原含量的常數(shù),,即 111ug 糖原用蒽酮試劑顯色相當(dāng)于

100ug 葡萄糖用蒽酮所試劑顯示的顏色,;C 標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.1mg/mL,;V1:加入反應(yīng)體系中待測(cè)樣本體積,,0.06mL;V2:加入提取液體積,,5mL,; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL,;W:樣本鮮重,g,。

注意:低檢測(cè)限為 10ng/g  鮮重或 0.1ng/ mg prot 。

 

葡萄糖含量試劑盒說明書(測(cè)組織,、細(xì)菌或細(xì)胞)

 

 

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