貨號(hào)：YC1131                                                 規(guī)格：100管/96樣

糖原含量試劑盒說明書

微量法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

糖原是由葡萄糖單位構(gòu)成的高分子多糖,，是糖的主要的儲(chǔ)存形式之一,，主要貯存在肝和肌肉中作為備用能量，分別稱為肝糖原和肌糖原,。肝糖原可調(diào)節(jié)血糖濃度,，當(dāng)血糖升高時(shí)可在肝

臟合成糖原，血糖降低時(shí),，肝糖原則分解為葡萄糖以補(bǔ)充血糖,。因此，肝糖原對(duì)維持血糖的相對(duì)平衡十分重要,。肌糖原是肌肉中糖的儲(chǔ)存形式,在劇烈運(yùn)動(dòng)消耗大量血糖時(shí),，肌糖原不能直接分解成血糖，必須先分解產(chǎn)生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過糖異生轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃蚱咸烟恰?/span>

測(cè)定原理：

蒽酮法,。利用強(qiáng)堿性提取液提取糖原,，在強(qiáng)酸性條件下利用蒽酮顯色劑測(cè)定糖原含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板,、濃硫酸（不允許快遞）和蒸餾水,。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存,；

試劑一：0.1mg/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 10mL×1 瓶,，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶,， 4℃保存,；

糖原提取：

1﹑細(xì)胞或細(xì)菌：收集500~1000萬細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；加入0.75mL提取液超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％或200W,，超聲3s，間隔10s,，重復(fù)30次）；轉(zhuǎn)移至10mL試管中,，95℃水浴20min（蓋緊，防止水分散失）,，隔5min振搖試管1次,，使充分混勻；取出試管冷卻后,，用蒸餾水定容到5ml，混勻,，8000g 25℃離心10min，取上清液待測(cè),。

2﹑組織：稱取0.1~0.2g樣品，加入0.75ml 提取液充分勻漿,；轉(zhuǎn)移至10ml試管中,；95℃水浴 20min（蓋緊,，防止水分散失），隔5min振搖試管1次,，使充分混勻,；待組織全部溶解后，取出試管冷卻后,，用蒸餾水定容到5ml,，混勻，8000g 25℃離心10min,，取上清液待測(cè),。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃,。

3、試劑二工作液的配制：在試劑二中倒入6mL蒸餾水,，緩慢倒入24mL濃硫酸,，充分溶解混勻后使用,；用不完的試劑4℃保存一周,；

4,、加樣表（在 EP 管中反應(yīng)） ：

混勻,，置95℃水浴10min（蓋緊,，防止水分散失），冷卻,，取200μL轉(zhuǎn)移至微量石英比色皿或 96孔板中，于620nm波長(zhǎng)處,，分別讀取空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管吸光度,，分別記為 A1、A2 和 A3,。

注意：1、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要測(cè)一次,。

2,、如果 A3-A1大于2,，需要將樣本用蒸餾水稀釋,，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

糖原含量的計(jì)算：

1,、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

糖原（mg/g 鮮重）＝1.11×(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

= 0.555×(A3-A1)÷（A2-A1)÷W

2,、按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

糖原(mg/mg prot)＝1.11×(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)

=0.111×(A3-A1) ÷（A2-A1) ÷Cpr

1.11：是此法測(cè)得葡萄糖含量換算為糖原含量的常數(shù),，即 111ug 糖原用蒽酮試劑顯色相當(dāng)于

100ug 葡萄糖用蒽酮所試劑顯示的顏色,；C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.1mg/mL,；V1：加入反應(yīng)體系中待測(cè)樣本體積,，0.06mL；V2：加入提取液體積,，5mL,； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本鮮重，g,。

注意：低檢測(cè)限為 10ng/g  鮮重或 0.1ng/ mg prot 。

葡萄糖含量試劑盒說明書（測(cè)組織,、細(xì)菌或細(xì)胞）