人乳腺癌細(xì)胞（MDA-MB-231）

細(xì)胞介紹

MDA-MB-231來自患有轉(zhuǎn)移乳腺腺癌的51歲白種人女病人的胸水,。 在裸鼠和ALS處理的BALB/c小鼠中，它能形成低分化腺癌（III級）,。細(xì)胞表達(dá)WNT7B致癌基因,。 此細(xì)胞株可能作為轉(zhuǎn)染宿主。

細(xì)胞特性

1） 來源：女性,，乳腺,；源自轉(zhuǎn)移部位：胸腔積液

2） 形態(tài)：貼壁生長，上皮樣

3） 含量：>1x10⁶

4） 污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

收到細(xì)胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2） 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時,，hao在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行,，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,，同時給剛收到的細(xì)胞拍照,，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3） 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4） 貼壁細(xì)胞：在運輸過程中貼壁細(xì)胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第yi次傳代建議1：2傳代 。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1)  L15（推薦iCell-0009）基礎(chǔ)培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%；1%雙抗,。

關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項：

（1）該培養(yǎng)基不需要通入CO₂

（2）細(xì)胞形態(tài)大部分為紡錘狀,，也有部分細(xì)胞呈現(xiàn)圓形，培養(yǎng)過程中會有少量懸浮細(xì)胞,。

（3）如果細(xì)胞生長太過緩慢,，可以適當(dāng)提高血清濃度到15%-20%。

2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，100%,； 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3) 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

注：第yi次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

下面T25瓶為類；

      1,，細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

      2,，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x10⁶/ml,，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識。

      3,，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。

2. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

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