myPOLS Biotec正在開發(fā)新一代的DNA聚合酶

用于和可靠的應(yīng)用,，例如個(gè)性化醫(yī)療,，病原體檢測，DNA和RNA診斷,，法醫(yī)學(xué)等等,。

我們的研發(fā)活動包括：

• 改進(jìn)的DNA聚合酶用于SNP檢測和甲基化特異性PCR。
• 病原體檢測分析,，例如用于流感和諾如病毒診斷,。
• 具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的熱穩(wěn)定DNA聚合酶。
• 抑制劑抗性聚合酶,，用于從樣品中直接PCR,，如全血，唾液,，細(xì)菌,，細(xì)胞 - 顆粒，植物等,。 

后但并非不重要：我們所有的酶和混合物都是在康斯坦茨內(nèi)部生產(chǎn)的,，并經(jīng)過常規(guī)測試，符合高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),。

myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學(xué)的生物技術(shù)公司,，來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們在高通量DNA聚合酶設(shè)計(jì)方面的專業(yè)知識,，我們?yōu)槟膽?yīng)用定制酶,。

Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix

包含所有必需的組分，包括dNTP和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,，可在所有標(biāo)準(zhǔn)PCR循環(huán)儀中實(shí)現(xiàn)成功可靠的實(shí)時(shí)qPCR和RT-qPCR,。包含的酶由我們的*表現(xiàn),，熱啟動配方，工程Taq DNA聚合酶和Volcano3G DNA聚合酶的混合物組成。該混合物被設(shè)計(jì)成適合多重PCR,，病原體檢測qPCR和各種基于探針的DNA和RNA靶標(biāo)的qPCR,。 

包含的Volcano3G DNA聚合酶是一種工程化的,，極其熱穩(wěn)定的逆轉(zhuǎn)錄酶和組合的DNA聚合酶,，通過定向的人工進(jìn)化獲得?；谶m體的DNA聚合酶的熱啟動制劑防止錯(cuò)誤擴(kuò)增,。高于50°-55°C的溫度會使適體的二級結(jié)構(gòu)熔化并使聚合酶釋放。 

 應(yīng)用

• 快速檢測和鑒定RNA和DNA靶標(biāo)
• 逆轉(zhuǎn)錄qPCRs（RT-qPCRs）
• qPCRs（DNA或RNA目標(biāo)）
• 多重PCR
• 實(shí)時(shí)PCR
• 基于探針的PCR
• 病原體檢測
• 入門擴(kuò)展 
• 終點(diǎn)PCR
• 篩選/高通量PCR
• SELEX

典型的RT-PCR方案

可以使用兩步法和三步法PCR方案,。

* = Volcano3G DNA聚合酶允許直接來自RNA模板的“零步”RT-PCR（沒有等溫逆轉(zhuǎn)錄步驟）,，因?yàn)槟孓D(zhuǎn)錄也在循環(huán)PCR延伸步驟期間與DNA擴(kuò)增同時(shí)發(fā)生。因此,，逆轉(zhuǎn)錄步驟是任選的,，并且在某些情況下可以省略。

** =通過運(yùn)行溫度梯度理想地建立新的RT-PCR,，以便找到每個(gè)引物對的*逆轉(zhuǎn)錄/退火/延伸溫度,。引物的退火溫度受其核酸序列和反應(yīng)緩沖液組成（鹽和pH）的強(qiáng)烈影響。

通常,，Volcano3G DNA聚合酶是*熱穩(wěn)定的,，并且在55-95°C之間活躍。

反應(yīng)設(shè)置

使用的實(shí)驗(yàn)建議：

在退火/延伸步驟中使用溫度梯度進(jìn)行PCR,，以找到測定的宜溫度,。

大多數(shù)RT-PCR分析在短時(shí)間80℃（1分鐘）變性步驟和50-55℃（10分鐘）的逆轉(zhuǎn)錄步驟以及標(biāo)準(zhǔn)PCR循環(huán)條件下都能很好地起作用。

建議的反應(yīng)設(shè)置 

* =推薦的模板濃度在0.004ng /μl-0.1μg/μl（總RNA或基因組DNA）之間,。

在使用前仔細(xì)旋轉(zhuǎn)并混合所有溶液,。

質(zhì)量控制

RT-PCR活性：測試Volcano3G RT-PCR Mix的成功RT-PCR性能。在實(shí)時(shí)PCR循環(huán)儀中從人總RNA提取物擴(kuò)增151bp片段（HPRT1 mRNA）,，并將其顯示為單個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物,。
DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物監(jiān)測Volcano3G DNA聚合酶活性并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性。
酶濃度通過蛋白質(zhì)特異性染色確定,。有關(guān)批次特定濃度,，請通過[email protected]查詢更多信息。

存儲

本產(chǎn)品采用冷藏包裝。請?jiān)诘诌_(dá)-20°C時(shí)存放產(chǎn)品,。
通過以等分試樣存儲來小化凍融循環(huán)的次數(shù),。對于日常使用，我們建議將等分試樣保持在4°C,。

Volcano3G是否具有RNAse-H樣活性？

Volcano3G來自Taq DNA聚合酶,，因此它沒有任何RNase-H活性,。在循環(huán)PCR延伸步驟期間，逆轉(zhuǎn)錄與DNA擴(kuò)增同時(shí)發(fā)生,。

然而,，Volcano3G具有核酸酶結(jié)構(gòu)域作為Taq野生型酶，可用于基于水解的實(shí)時(shí)PCR,。 

我怎樣才能將擴(kuò)增限制在mRNA靶標(biāo)上,？

我只獲得引物二聚體。如何建立我的RT-PCR,？

我可以用Volcano逆轉(zhuǎn)錄長RNA鏈（> 500 bp）嗎,？

我在瓊脂糖凝膠上看到一個(gè)低分子帶 - 這是Volcano3G RT PCR Mix的污染嗎？

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