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當(dāng)前位置：迪圖（上海）生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>PCR蓋緊蓋子試劑蒸發(fā)問題詳解
其實試劑的蒸發(fā)是PCR實驗中常見的問題之一,，影響試劑蒸發(fā)的因素也比較多,。
蒸發(fā)是指試劑在PCR實驗過程中,，反應(yīng)液在高溫下氣化，又凝結(jié)在管壁或頂蓋上,，形成水霧或水珠,，或直接從管蓋或覆膜的氣隙中溢出，造成反應(yīng)液濃度變化,、反應(yīng)液量減少,，有的甚至蒸干，導(dǎo)致實驗無效等,。
影響試劑蒸發(fā)的因素主要有以下三點：
01熱蓋壓力,、溫度
在PCR實驗中，我們一般通過加熱蓋的辦法來防止試劑蒸汽的凝結(jié),，熱蓋溫度一般比反應(yīng)液的溫度高,，以防止蒸汽凝結(jié)。
PCR 儀的熱蓋大致可以分為以下四種：非可調(diào)式熱蓋、可調(diào)節(jié)式熱蓋,、自適應(yīng)式熱蓋和自動式熱蓋,。而可調(diào)節(jié)式熱蓋利用手?jǐn)Q壓緊式，擰不緊會發(fā)生試劑蒸發(fā),，通過增加熱蓋壓力可以盡量減少邊緣蒸發(fā)的現(xiàn)象,。有時擰得過緊反而可能出現(xiàn)壓壞管子、擰壞旋鈕的情況,。通常,，采用電動智能熱蓋，能夠自動感應(yīng)不同高度的耗材,，自動壓緊耗材,，壓力均勻且恒定，從而能夠減少試劑蒸發(fā)和人工誤差,，提高實驗準(zhǔn)確度和可重復(fù)性,。
02耗材形變
對于蒸汽的泄漏，大部分人認(rèn)為是熱蓋的壓力不夠所致,。熱蓋的壓力固然很重要,，但這僅僅是一個方面，其實耗材也很關(guān)鍵,。
PCR 孔板通常為塑料材質(zhì),，在受熱后發(fā)生膨脹，產(chǎn)生較大地變形,，用于放置 PCR 孔板的 PCR 金屬基座則受熱膨脹率極小,，PCR 孔板受熱膨脹后不能正常沿平面延展進(jìn)而中間形成拱起狀態(tài)，從而造成上方熱蓋不能全面地與 PCR 孔板上表面充分接觸,，造成溫度,、壓力不均，引起 PCR 孔板邊緣試劑的蒸發(fā),，影響 PCR 檢測效果,。
03耗材密封不嚴(yán)
熱蓋與耗材壓緊并不等于蓋緊了 PCR 管蓋，PCR 孔板質(zhì)量參差不齊,。優(yōu)質(zhì)的耗材,，管口和蓋子表面光滑，盒蓋后密封性好,，不易泄漏,。而劣質(zhì)耗材，管口不平,，有徑向紋路,，容易造成泄漏,，甚至蒸干。
因此在PCR實驗中,，盡量選擇優(yōu)質(zhì),、合適的耗材。同時也可以擴大反應(yīng)體系,，盡量減少體系蒸發(fā)對反應(yīng)的影響,。
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