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當(dāng)前位置：迪圖（上海）生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>PCR蓋緊蓋子試劑蒸發(fā)問題詳解
其實(shí)試劑的蒸發(fā)是PCR實(shí)驗(yàn)中常見的問題之一,，影響試劑蒸發(fā)的因素也比較多,。
蒸發(fā)是指試劑在PCR實(shí)驗(yàn)過程中，反應(yīng)液在高溫下氣化,，又凝結(jié)在管壁或頂蓋上,，形成水霧或水珠，或直接從管蓋或覆膜的氣隙中溢出,，造成反應(yīng)液濃度變化,、反應(yīng)液量減少，有的甚至蒸干,，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無效等,。
影響試劑蒸發(fā)的因素主要有以下三點(diǎn)：
01熱蓋壓力、溫度
在PCR實(shí)驗(yàn)中,，我們一般通過加熱蓋的辦法來防止試劑蒸汽的凝結(jié),，熱蓋溫度一般比反應(yīng)液的溫度高，以防止蒸汽凝結(jié),。
PCR 儀的熱蓋大致可以分為以下四種：非可調(diào)式熱蓋,、可調(diào)節(jié)式熱蓋、自適應(yīng)式熱蓋和自動(dòng)式熱蓋,。而可調(diào)節(jié)式熱蓋利用手?jǐn)Q壓緊式,，擰不緊會(huì)發(fā)生試劑蒸發(fā)，通過增加熱蓋壓力可以盡量減少邊緣蒸發(fā)的現(xiàn)象,。有時(shí)擰得過緊反而可能出現(xiàn)壓壞管子,、擰壞旋鈕的情況。通常,，采用電動(dòng)智能熱蓋,，能夠自動(dòng)感應(yīng)不同高度的耗材,，自動(dòng)壓緊耗材，壓力均勻且恒定,，從而能夠減少試劑蒸發(fā)和人工誤差,，提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度和可重復(fù)性。
02耗材形變
對(duì)于蒸汽的泄漏,，大部分人認(rèn)為是熱蓋的壓力不夠所致,。熱蓋的壓力固然很重要，但這僅僅是一個(gè)方面,，其實(shí)耗材也很關(guān)鍵,。
PCR 孔板通常為塑料材質(zhì)，在受熱后發(fā)生膨脹,，產(chǎn)生較大地變形,，用于放置 PCR 孔板的 PCR 金屬基座則受熱膨脹率極小，PCR 孔板受熱膨脹后不能正常沿平面延展進(jìn)而中間形成拱起狀態(tài),，從而造成上方熱蓋不能全面地與 PCR 孔板上表面充分接觸,，造成溫度、壓力不均,，引起 PCR 孔板邊緣試劑的蒸發(fā),，影響 PCR 檢測(cè)效果。
03耗材密封不嚴(yán)
熱蓋與耗材壓緊并不等于蓋緊了 PCR 管蓋,，PCR 孔板質(zhì)量參差不齊,。優(yōu)質(zhì)的耗材，管口和蓋子表面光滑,，盒蓋后密封性好,，不易泄漏。而劣質(zhì)耗材,，管口不平,，有徑向紋路，容易造成泄漏,，甚至蒸干,。
因此在PCR實(shí)驗(yàn)中，盡量選擇優(yōu)質(zhì),、合適的耗材,。同時(shí)也可以擴(kuò)大反應(yīng)體系，盡量減少體系蒸發(fā)對(duì)反應(yīng)的影響,。
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