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當(dāng)前位置：迪圖（上海）生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>普通PCR引物與qPCR引物的對比
普通PCR和熒光定量PCR的檢測方式具有較大的差別。熒光定量PCR實時監(jiān)測與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光,，普通PCR通過檢測插入DNA中核酸染料的量來測定PCR最終產(chǎn)物量,。熒光定量PCR可以通過擴增曲線進行精確定量，普通PCR則是通過電泳的方式進行定性分析,。那么在普通PCR和熒光定量PCR的引物設(shè)計方面,，有什么相同點和不同點呢？今天小編就給大家匯總一下,。
相同處：
? 序列的查找是一致的,。
? 序列選取應(yīng)在基因的保守區(qū)段。
? 選取合適的擴增片段大小,。
? 避免引物自身或與引物之間形成4個或4個以上連續(xù)配對,。
? 避免引物自身形成環(huán)狀發(fā)卡結(jié)構(gòu)。
? Tm值在55－65℃,，GC含量在40%－60%,。
? 引物之間的Tm相差避免超過2℃。
? 引物的3’端避免出現(xiàn)3個或3個以上連續(xù)相同的堿基,。
不同處：
熒光定量PCR 引物
? PCR產(chǎn)物長度：要求在300bp以內(nèi),，一般80-150bp之間。
? 引物特異性：對引物要求高,，盡量減少引物二聚體的產(chǎn)生,，熔解曲線要求單一產(chǎn)物。
? 擴增效率：熒光定量 PCR的目的是進行定量或者相對定量,，擴增效率應(yīng)在90%—110%之間,。
? 多對目的基因同時擴增，文獻上查來的引物條件會不同，需要設(shè)計盡可能條件一致的引物,。
? 目的基因含量比較低時,，需要設(shè)計靈敏度比較高的引物。
普通PCR 引物
? 普通PCR的擴增長度,，根據(jù)實驗的要求不同,，一般是從150bp到幾千bp不等。
? 相對于熒光定量PCR,，普通PCR對二級結(jié)構(gòu)要求較低,。
? 對擴增效率要求不高。
? 可以選用梯度PCR儀,，選擇不同退火溫度,，對引物退火溫度要求不需要一致。
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