兔子凝血因子Ⅱ elisa原理  elisa kit

產(chǎn)品名稱(chēng)：兔子凝血因子Ⅱ ELISA試劑盒

英文名稱(chēng)：Rabbit coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA KIT

試驗(yàn)原理：
    IL-1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知IL-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。先將IL-1和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育,。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A,、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中IL-1的濃度呈比例關(guān)系。
操作步驟：
1．使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2．根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí)。
4．甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
6．甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
9．在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。

結(jié)果 判 斷 與 分 析：
1,、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的IL-1標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線,，樣品的IL-1含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。
3,、檢測(cè)值范圍：0-800pg/ml
4,、敏感度： 1.0 pg/ml

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