綿羊白介素6  elisa kit  elisa原理

產(chǎn)品名稱：綿羊白介素6 ELISA試劑盒

英文名稱：Sheep Interleukin 6,IL-6 ELISA KIT

產(chǎn)品包裝：48T/96T
保存條件:2-8℃
樣品收集,、處理及保存方法：
  1,、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅       速小心地分離。
  2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
  3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
  4,、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血       清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

試驗原理：
    IL-1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知IL-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將IL-1和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育,。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-1的濃度呈比例關(guān)系,。
操作步驟：
1．使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
4．甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8．取出酶標(biāo)板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值,。

試劑盒性能：
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng),。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。

結(jié)果 判 斷 與 分 析：
1,、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的IL-1標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）,，做得相應(yīng)的曲線，樣品的IL-1含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。
3,、檢測值范圍：0-800pg/ml
4、敏感度： 1.0 pg/ml

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